[发明专利]一种抗HIV药物关键中间体β-胸苷的检测方法

说明书

本发明提供了一种抗HIV药物关键中间体β‑胸苷的检测方法，其采用高效液相色谱进行分析检测，将β‑胸苷产品成品经预处理后按以下色谱条件进行检测：色谱柱：C18柱或其他等效的色谱柱；流动相：甲醇水溶液；流速：0.8ml/min‑1.2ml/min；检测器：紫外检测器；检测波长为260nm‑270nm；色谱柱温度：25℃‑35℃；本发明快速、准确，为β‑胸苷产品成品中β‑胸苷的测定提供了一种可靠的分析方法，同时本发明操作简单、方便实用、安全环保、对发酵法生产β‑胸苷具有现实的指导意义，且本发明的检测方法精密度好、重复性高，能够快速、准确地测定β‑胸苷产品成品中β‑胸苷的含量，有助于提高抗HIV药物关键中间体β‑胸苷的质量和安全可控。

技术领域

本发明涉及β-胸苷检测领域，尤其是指一种抗HIV药物关键中间体β -胸苷的检测方法。

背景技术

齐多夫定(叠氮脱氧胸苷)是第一个获得美国FDA批准生产的抗艾滋病药物，因其疗效确切，成为“鸡尾酒”疗法的最基本的组合成分。β-胸苷作为合成抗艾滋病药物齐多夫定关键中间体，其β-胸苷产品技术含量高并且价格高利润丰厚，主要出口到美国、印度等，给国家创外汇，为公司带来经济效益。但是，由于没有国际标准、国家标准或行业标准可以参考，为满足客户、控制产品质量，β-胸苷产品质量的关键参数就是控制有关物质(杂质)和提高含量。为此，需寻求一种简单可靠、经济实用、精密度高的检测方法，以检测β-胸苷产品中杂质和β-胸苷的含量，来控制产品质量。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明目的在于提供一种抗HIV药物关键中间体β-胸苷的检测方法，为β-胸苷产品成品中有关物质检测和β-胸苷的含量测定提供一种快速、准确、可靠地检测分析方法，减少盲目性。为实现上述之目的，本发明采取如下技术方案：

(二)技术方案

一种抗HIV药物关键中间体β-胸苷的检测方法，采用高效液相色谱法对β-胸苷的含量以及有关物质进行检测，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取β-胸苷产品成品，用流动相溶解并稀释成每1ml中约含1mgβ-胸苷的溶液，作为供试品溶液(需临用新制)；

(2)对照品溶液的制备：精密量取1mlβ-胸苷对照品，置100ml量瓶中，用流动相稀释至100ml刻度，摇匀，作为对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法对β-胸苷进行分析检测：

①、检测条件：所述高效液相色谱法所采用的检测器为紫外检测器，其色谱条件如下：色谱柱：C18柱或其他等效的色谱柱；流速： 0.8ml/min-1.2ml/min；色谱柱温度：25℃-35℃；检测波长：260nm-270nm；

②、检测方法：检测时，取对照品溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％；再精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。

进一步，所述供试品溶液色谱图中的杂质峰，单个杂质峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5％)，各杂质峰面积的和不大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0％)。

进一步，所述β-胸苷的检测方法，具体包括如下步骤：

(1)样品制备：取β-胸苷产品成品50ml，18000r/min离心10分钟，取上清液，量取Xml置于容量瓶中，加水溶解并稀释至100倍体积，摇匀， 0.45μm微孔滤膜过滤，再取过滤液Yml移至量瓶中，加水稀释至10倍体积，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，得待测液；

(2)采用高效液相色谱进行分析检测，标准工作液设有不包含零点的六个浓度梯度，以β-胸苷量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，按外标法计算待测液中β-胸苷的含量，即得β-胸苷产品成品中β- 胸苷的含量。