[发明专利]核酸检测微球、制备方法、试剂盒及高通量核酸检测方法

说明书

本申请提供一种核酸检测微球、制备方法、试剂盒及高通量核酸检测方法。所述核酸检测微球由具有荧光编码信息的核体和引物或探针的包裹层。多种核酸检测微球随机分布到由待检测样本核酸反应液生成的微液滴中。当温度升高到60摄氏度以上，包覆层融化，引物、探针释放到待检测样本核酸反应液中，从而组成完整的核酸扩增反应体系，荧光编码核体留在核酸扩增液中，作为标记微液滴的荧光标签。通过检测每个微液滴中的具有荧光编码信息的核体，筛选出有且只有一个核体的微液滴作为有效液滴进入后续的分析，获得有效微液滴中引物、探针种类。然后读取核酸扩增反应之后的报告荧光信号，获取有效微液滴中是否有相应的待检测目标核酸分子。

技术领域

本申请涉及核酸检测分析领域，特别是涉及一种核酸检测微球、制备方法、试剂盒及高通量核酸检测方法。

背景技术

近年来，PCR(Digital PCR，dPCR)技术迅速发展。聚合酶链式反应(PolymeraseChain Reaction，PCR)，是一种用于扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。PCR包括微滴式PCR检测方法和芯片式检测方法。

微滴式PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个皮升或纳升级的微滴，其中，每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，检测微液滴，但是对于传统的PCR检测技术，只能检测有限的目标序列(与设备荧光通道数和设计的探针种类有关)。PCR检测如果要检测十几种、几十种或者上百种目标序列，则需要重复多次检测，增大了工作量，耗费大量样本，且时间工作效率低。

发明内容

基于此，有必要针对传统PCR检测技术不断反复的多次检测、工作量大且耗费时间的问题，提供一种可以实现高通量、高灵敏度、检测时间短的用于高通量核酸检测分析的核酸检测微球、制备方法、试剂盒及高通量核酸检测方法。

本申请提供一种核酸检测微球，用于高通量核酸检测分析。所述核酸检测微球包括核体以及包覆层。所述核体具有荧光编码信息。所述包覆层包裹所述核体，所述包覆层包括基体以及分散于所述基体的引物，且所述引物与所述核体唯一对应。

在其中一个实施例中，所述包覆层还包括探针，且所述探针与所述引物分散于所述基体，并与所述核体唯一对应。

在其中一个实施例中，所述基体为琼脂糖凝胶。

在其中一个实施例中，所述核体为含有荧光染料的实体球。

在其中一个实施例中，所述核体的直径为10微米～100微米。

在其中一个实施例中，所述包覆层厚度为10微米～100微米。

在其中一个实施例中，一种核酸检测微球的制备方法，包括：

S110，提供多个核体与引物溶液；

S120，提供凝胶粉末，将所述凝胶粉末加入到双蒸水中获得凝胶粉溶液，并将所述凝胶粉溶液加热至澄清，获得包覆层制备液；

S130，在凝胶熔融温度，将所述多个核体、所述引物溶液与所述包覆层制备液混合，获得核酸检测微球制备溶液；

S140，在所述凝胶熔融温度，将所述核酸检测微球制备溶液微滴化，形成多个核酸检测微球液滴；

S150，将所述多个核酸检测微球液滴冷却，并通过流式分选获得多个核酸检测微球。

在其中一个实施例中，在所述步骤S150中，所述核酸检测微球为含有单个所述核体的核酸检测微球。

在其中一个实施例中，在所述步骤S120中，所述凝胶粉末为琼脂粉或聚乙二醇双丙烯酸酯等。

在其中一个实施例中，所述步骤S140包括：