[发明专利]BTBD9基因作为牛超数排卵性状分子标记的应用

说明书

本发明公开了BTBD9基因作为牛超数排卵性状分子标记的应用，以提取的牛基因组DNA为模板，设计特异性引物一对，克隆牛BTBD9基因基因的部分DNA序列，通过测序及基因型分型并将不同基因型与超数排卵性状进行关联分析，为牛的标记辅助选择提供分子标记；该位点作为牛繁殖和生产性能辅助选择的分子标记并应用于遗传改良提供了重要的理论依据并具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及牛BTBD9基因片段的克隆以及其在牛超数排卵性状标记辅助选择中的应用。

背景技术

随着分子生物学技术的成熟，超数排卵技术无论在野生动物研究与保护、家畜育种与繁殖中的应用越来越广泛。通过超数排卵技术，可以充分挖掘雌性动物的繁殖潜力，为人工授精、胚胎移植提供充足的卵母细胞，并且，也是基因修饰动物研究与应用中的一种重要技术手段。然而，虽然众多研究通过优化超数排卵关键环节中的激素使用、处理时间与周期等使超数排卵效果有了很大提升，但作为超数排卵基本影响因素-个体的一种用潜力的参差不齐严重限制了超数排卵的效果。

超数排卵的效果可简单而直接的通过获得的总胚胎数和可用胚胎数评价。研究表明，超数排卵效果受遗传基础，也就是基因的影响巨大，而基因多态性往往决定了基因的功能。在基因多态性中，单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）因其广泛而重要的作用（Kidd et. al.,2006；Butler et. al.,2010；Thomas et. al.,2011）成为动物相关科学研究和实际生产、应用中长期以来备受关注的一类。众多研究也表明，SNP对动物（包括猪、牛、羊、兔、禽类、鱼类等）繁殖性状具有重要调控作用，其中不乏对于超数排卵效果的影响（Kasarda et. al.,2014；Deng et. al.,2015；Lan et. al.,2015；Gaddis et.al.,2016；Gaviria et. al.,2016），甚至可用于家畜种用性能的评定（Speed et. al.,2014）。

较早研究表明，BTBD9基因SNP多态性与不安腿综合征具有潜在关联。而最近研究表明，其多态性与潜在功能可能影响动物的细胞分化（Freeman et. al.,2015）、生长发育（Wang et. al.,2016；Goszczynski et. al.,2018）。而在动物繁殖领域，BTBD9的相关研究及应用较少。

申请人通过对该基因遗传多态性和牛超数排卵性状进行的关联分析，明确了BTBD9基因特殊位点单核苷酸遗传多态性及其准确鉴定方法，并确定了该位点遗传多态性对牛超数排卵效果的影响，为将其作为牛繁殖和生产性能辅助选择的分子标记并应用于遗传改良提供了重要的理论依据和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于克隆牛BTBD9基因片段，鉴定其特定的突变位点以作为牛超数排卵性能相关基因的多态性检测方法，为牛标记辅助育种提供一种有意义的分子标记。

本发明通过以下技术方案实现：

一种通过特异性引物和PCR(Polymerase Chain Reaction)方法获得的牛超数排卵性能相关基因BTBD9的516bp序列，如表SEQ ID NO:1所示。

所获得BTBD9基因片段的DNA下列中有如表SEQ ID NO:1所述的C→T的碱基突变，导致基因单核苷酸多态性（SNP）的产生。

一种筛选适用于牛超数排卵性状的分子标记的方法，按照以下步骤制备：