[发明专利]一种检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸及其制备方法与应用

说明书

本发明属于免疫测定技术方法领域，具体涉及一种检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸及其制备方法与应用。该荧光淬灭试纸包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，其结合垫上喷涂有胶体金颗粒标记的OA单抗，硝酸纤维素膜上的检测线为荧光微球与OA‑BSA的混合液，质控线为荧光微球。该荧光淬灭试纸特异性强，没有交叉反应，其灵敏度为1.56ppb，与同参数胶体金试纸相比提高9.6倍，其检测限为3.12～50ppb，检测时间短至9min。所得荧光淬灭试纸对贝肉组织的干扰具有很高的稳定性，通过配合简易的荧光免疫层析照相仪及数据分析软件就能够达到对OA毒素的定量，其结果判断直观，不容易导致非专业人员的误判，具有巨大的发展和应用前景。

技术领域

本发明属于免疫测定技术方法领域，具体涉及一种检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸及其制备方法与应用。

背景技术

藻类生物毒素是继细菌、寄生虫、病毒和化学污染物之后另一个威胁海产品食用安全的重要因素，其中，腹泻性贝类毒素(DSP)是一类大环内酯类或聚醚类化合物，在全球海域中均有分布。误食了被DSP污染的贝类会引起胃肠紊乱，出现恶心、腹痛、腹泻、呕吐等症状。大田软海绵酸(OA)是DSP的主要成分，我国2001年规定，水产品中OA安全标准为20μg/100g可食组织，2006年规定无公害水产品OA不得检出。

目前，赤潮毒素的检测方法主要有生物、化学和免疫分析法等。生物分析法应用广泛和操作简单，但测量结果重复性差、灵敏度低。化学分析法如高效液相色谱法，其灵敏度高、检出限低，能实现毒素定性和定量分析，但是该法的样品前处理复杂，如毒素DSP必须经衍生才能检测，衍生后的产物不稳定，容易造成检测结果误差。为克服这一缺陷，色谱-质谱联用技术逐渐成为检测海洋毒素的潮流，但该分析法需要的仪器昂贵，只能在实验室检测，这些因素限制了该方法的广泛应用。基于抗原-抗体反应检测的酶联免疫分析法具有高特异性和高灵敏度的特点，分析过程中无需样品前处理，但检测过程需要进行酶反应的比色检测，检测过程长达数小时且检测过程仍需要实验室环境，无法满足现场快速分析检测的要求。胶体金免疫侧向层析技术具有快速、方便，能够达到现场分析的要求，但胶体金免疫侧向层析法仍存在一些不足。首先，该法的检测结果是非直观的，即T线出现信号表示结果为阴性，反之为阳性，这样很容易导致非专业人员的误判且不能定量，其次，胶体金免疫侧向层析试纸条判断结果为阳性的标准是T线不能观察到信号，即需要较大量的待测物浓度才能使T线完全没有信号出现，这较大程度的影响了试纸条的灵敏度。

发明内容

为克服现有技术的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种直观高灵敏度的检测大田软海绵酸(OA)的荧光淬灭试纸。

本发明的另一目的在于提供上述检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述荧光淬灭试纸的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸，以PVC为底板，其上依次连接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，各部分在相邻处重叠，结合垫上喷涂有胶体金颗粒标记的OA单抗，硝酸纤维素膜的平面中设置有检测线和质控线，检测线为荧光微球与OA-BSA的混合液，质控线为荧光微球；

其中，OA-BSA为OA与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到的检测完全抗原。

上述检测大田软海绵酸的荧光淬灭试纸的制备方法，包括以下步骤：

(1)OA人工抗原的制备

用将OA与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联，将产物用PBS(磷酸盐缓冲液)稀释，得到检测完全抗原OA-BSA；

(2)样品垫的处理

将BSA、PEG4000、PVP40000和Tween-20加至PBS中，得到样品垫处理液，将样品垫浸泡于样品垫处理液中，干燥；