[发明专利]高油酸花生快速选种试剂盒

说明书

本发明提供一种高油酸花生快速选种试剂盒，研究表明脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)是控制花生油酸性状的关键基因。FAD2由位于不同基因组上的两个非等位基因FAD2A和FAD2B共同编码，本发明根据这一遗传基因为基础，以胶体金试纸条为载体，按照花生高油酸突变基因中的基因序列的保守区，分别设计针对野生及突变的FAD2A基因和FAD2B基因标记的多重扩增引物，优化引物组合与反应体系；利用核酸杂交的原理，将带有标记的扩增产物与胶体金试纸条上特异性抗体进行结合，建立了检测FAD2A基因和FAD2B基因的PCR扩增与胶体金免疫侧流层析杂交技术试剂盒；操作简便，特异性强且检测灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种花生育种筛选领域，特别是涉及一种高油酸花生快速选种试剂盒。

背景技术

我国是世界上最大的花生生产、消费和出口国。花生在我国国民经济中具有重要的地位 和作用。油酸是花生油脂中的主要脂肪酸，占花生脂肪酸总量的39％～49％之间，在人体脂类 代谢中能降低有害胆固醇，但保持有益胆固醇的水平，从而减缓动脉粥样硬化，有效预防冠 心病等心脑血管疾病的发生。另外，油酸含量高，抗氧化能力强，产品不易氧化酸败，货架 寿命较长，耐储能力也强。因此，世界主要油料作物(大豆、油菜、花生)的育种者都把培 育高油酸新品种作为主要的育种目标。

在花生育种过程中，油酸等内在品质只有通过种子化学测试才能确定其具体含量，因此 在分离世代难以对油酸等品质性状进行选择。目前对花生高油酸种子的筛选通常采用的是近 红外种子无损伤选择技术，但该技术仅能对收获后种子的油酸含量进行检测后根据检测结果 预测，预测结果通常不够准确，有较大的误差，在筛选种子的过程中增加了无意义的成本， 并且还浪费种植成本。而且由于油酸含量的化学测定需要破坏籽粒，并且需要一定的样品量， 所以传统高油酸育种需要等到杂交后代推进到高世代，当性状基本稳定并且种子量较多时， 才进行高油酸性状的选择；而且油酸含量的化学测定成本较高，高世代检测样本量大(因为 其中包含许多非目标基因型)，也增加了育种成本，降低育种效率。因此发明一种在花生育 种过程中提高高油酸花生的育种效率，开发用于加快辅助育种的检测方法非常必要。

遗传研究表明，花生高油酸性状由两对隐性基因(ol1和ol2)共同控制。研究表明Δ12 脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)是控制花生油酸性状的关键基因。FAD2由位于不同基因组上的两 个非等位基因FAD2A和FAD2B共同编码，ol1是突变了的FAD2A基因，ol2是突变了的FAD2B 基因。这两个基因的突变引起酶结构、酶活性或表达调控的变化，共同导致高油酸性状的产 生。本发明根据这一遗传基因为基础，以胶体金试纸条为载体，设计一种方法简单、成本低 和结果稳定的高油酸花生快速选种试剂盒。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种高油酸花生快速选种试剂盒， 用于解决现有技术中结果误差大、成本高的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种高油酸花生快速选种试剂盒，利用生 物信息学技术，按照花生高油酸突变基因中的基因序列的保守区，分别设计针对野生及突变 的FAD2A基因和FAD2B基因标记的多重扩增引物，优化引物组合与反应体系；利用核酸杂交 的原理，将带有标记的扩增产物与胶体金试纸条上特异性抗体进行结合，建立了检测FAD2A 基因和FAD2B基因的PCR扩增与胶体金免疫侧流层析杂交技术试剂盒；操作简便，特异性强 且检测灵敏度高。

一种高油酸花生快速选种试剂盒包括有高油酸花生FAD2A突变基因型引物对，高油酸花 生FAD2B突变基因型引物对，花生FAD2A野生基因型引物对，花生FAD2B野生基因型引物对， TaqDNA聚合酶、无菌去离子水、阴性标准品、核酸免疫胶体金试纸条；