[发明专利]一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法、试剂盒及其应用。所述的快速检测方法包括：亚胺培南与待检测菌菌苔共同孵育，制备含有溴甲酚紫和产酸细菌的MH琼脂培养基，将与待检测菌菌苔孵育后的亚胺培南纸片贴在含有溴甲酚紫和产酸细菌的MH琼脂培养基上，孵育3.5～4.5小时，即可直接通过溴甲酚紫是否变色，进而判定待检测菌株是否为产碳青霉烯酶菌株。本发明的检测方法操作简单、分析快速、适用范围广、准确性和特异性高、结果易于判读。同时，本发明还提供基于所述快速检测方法建立的检测试剂盒，对于及早发现产碳青霉烯酶菌株并采取有效措施，对医院感染控制及临床流行病学检测具有重要意义，应用前景良好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法、试剂盒及其应用。

背景技术

碳青霉烯类抗生素在治疗由大多数革兰氏阳性及革兰氏阴性病菌造成的感染时具有显著的治疗效果，因此在临床上具有非常重要的作用。然而，随着细菌不断的进化，一些细菌能够产生碳青霉烯酶，即，随着产碳青霉烯酶的细菌的出现，导致许多临床使用碳青霉烯类药物治疗失败的案例出现。

目前，碳青霉烯酶失活方法(carbapenem inactivation method，CIM)是临床上检测产碳青霉烯酶菌株的一种常用的方法，因其价格低廉，操作简单，因此被广泛使用。但是，该方法的一个明显不足是，需要18～24小时才能得到检测结果，检测时间长。而Carba NP试验与Carba NP direct试验的技术要求较高，适用范围没有CIM广泛，需要特殊的试剂和专业人员操作。

尽早发现产碳青霉烯酶菌株并采取有效措施，对医院感染控制及临床流行病学检测具有重要意义。因此，研究开发操作简单、分析快速、适用范围广、准确性和特异性高的碳青霉烯酶检测方法具有迫切需求。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，所述的方法能够在3.5～4.5小时内快速检测出产生碳青霉烯酶的细菌。

本发明的再一目的在于提供一种快速检测产碳青霉烯酶菌株试剂盒。

本发明的又一目的在于提供所述检测方法或试剂盒的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，包括如下步骤：

(1)将亚胺培南药敏纸片置于含有无菌水的离心管中，对离心管进行涡旋，使纸片中的药物均匀扩散在无菌水中；或者将亚胺培南溶于含有无菌水中，并加入灭菌滤纸片；

(2)刮一接种环的待检测菌菌苔加至步骤(1)得到的离心管中共同孵育至少30分钟；

(3)在灭菌后的MH琼脂培养基中加入酸碱指示剂，冷却，并加入培养至对数期的产酸细菌，充分混匀，制备得到含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基；

(4)将所述的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基倾注于无菌培养皿中，自然晾干使琼脂凝固，其中，此时含产酸细菌和酸碱指示剂的MH琼脂培养基的颜色为酸碱指示剂的碱色；

(5)取出步骤(2)与待检测菌菌苔孵育后的亚胺培南药敏纸片或灭菌滤纸片，并贴在步骤(4)得到的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基的无菌培养皿中，孵育3.5～4.5小时；

(6)结果判读：

所述的酸碱指示剂的变色范围为pH 4.2～8，通过酸碱指示剂的颜色变化来来判定待检测菌是否为产碳青霉烯酶菌株；

若亚胺培南药敏纸片周围的MH琼脂培养基变为酸碱指示剂的酸色，判定该待检测菌为产碳青霉烯酶菌株；