[发明专利]一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将亚胺培南药敏纸片置于含有无菌水的离心管中，对离心管进行涡旋，使纸片中的药物均匀扩散在无菌水中；或者将亚胺培南溶于含有无菌水中，并加入灭菌滤纸片；

(2)刮一接种环的待检测菌菌苔加至步骤(1)得到的离心管中共同孵育至少30分钟；

(3)在灭菌后的MH琼脂培养基中加入酸碱指示剂，冷却，并加入培养至对数期的产酸细菌，充分混匀，制备得到含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基；

(4)将所述的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基倾注于无菌培养皿中，自然晾干使琼脂凝固，其中，此时含产酸细菌和酸碱指示剂的MH琼脂培养基的颜色为酸碱指示剂的碱色；

(5)取出步骤(2)与待检测菌菌苔孵育后的亚胺培南药敏纸片或灭菌滤纸片，并贴在步骤(4)得到的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基的无菌培养皿中，孵育3.5～4.5小时；

(6)结果判读：

所述的酸碱指示剂的变色范围为pH 4.2～8，通过酸碱指示剂的颜色变化来来判定待检测菌是否为产碳青霉烯酶菌株；

若亚胺培南药敏纸片周围的MH琼脂培养基变为酸碱指示剂的酸色，判定该待检测菌为产碳青霉烯酶菌株；

若亚胺培南药敏纸片周围的MH琼脂培养基不变色，而剩余部分MH琼脂培养基变为酸碱指示剂的酸色，判定该待检测菌为不产碳青霉烯酶菌株。

2.根据权利要求1所述的快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于：

步骤(3)所述的产酸细菌为能够产酸使酸碱指示剂变色的细菌；

步骤(3)中所述的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基中产酸细菌的终浓度为10⁵～10⁷CFU/mL；

步骤(3)中所述的酸碱指示剂的终浓度为0.01～0.02g/L；

步骤(3)中所述的冷却为冷却至40～45℃；

步骤(4)中所述的自然晾干的时间为至少25分钟。

3.根据权利要求1所述的快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的共同孵育的时间为30分钟；

步骤(3)所述的产酸细菌为嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的至少一种；

步骤(3)中所述的含有酸碱指示剂和产酸细菌的MH琼脂培养基中产酸细菌的终浓度为10⁷CFU/mL；

步骤(3)中所述的酸碱指示剂的终浓度为0.018g/L；

步骤(3)中所述的酸碱指示剂包括甲基红、氯酚红、对硝基酚、溴甲酚紫、溴酚红、溴百里香酚蓝、姜黄、中性红中的至少一种；

步骤(5)中所述的孵育的温度为产酸细菌的最适生长温度。

4.根据权利要求1所述的快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于：

当步骤(1)的操作为将亚胺培南溶于含有无菌水中时，所述的亚胺培南的终浓度为0.02～0.05μg/μL；所述的灭菌滤纸片为直径6～6.35mm的灭菌滤纸片；

步骤(3)中所述的冷却为冷却至40℃；

步骤(3)中所述的酸碱指示剂为溴甲酚紫；

步骤(4)中所述的自然晾干的时间为25～35分钟；

当所述的产酸细菌为嗜热脂肪芽孢杆菌时，步骤(5)所述的孵育的温度为60±5℃。

5.根据权利要求1所述的快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于：

当步骤(1)的操作为将亚胺培南药敏纸片置于含有无菌水的离心管中时，具体操作为：将一片含10μg亚胺培南的药敏纸片置于含有500μL无菌水离心管中，对离心管涡旋10～20秒；

步骤(4)中所述的自然晾干的时间为30分钟；

步骤(5)中所述的孵育的时间为3.5小时。

6.根据权利要求5所述的快速检测产碳青霉烯酶菌株的方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的培养至对数期为培养至产酸细菌的浓度达到10⁸CFU/mL；

步骤(3)中所述的混匀为振荡混匀；

步骤(3)中所述的灭菌为高压灭菌；

所述的涡旋的时间为15秒。