[发明专利]一种双葡基海藻糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种双葡基海藻糖的制备方法，涉及非还原性糖的生产方法领域，解决提高生产双葡基海藻糖效率的问题，其技术方案要点是：包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。

技术领域

本发明涉及非还原性糖的生产方法领域,更具体地说，它涉及一种双葡基海藻糖的制备方法。

背景技术

双葡基海藻糖是由一个麦芽糖和一个海藻糖通过α-1,4糖苷键结合的非还原性糖，是一种具有多种生物学功能的优质的非还原性糖。双葡基海藻糖很强的亲水性，具有保湿功能。除了保湿、抑制皮肤粗糙外，双葡基海藻糖还具有许多生物学功能，比如对细胞干燥的保护作用，细胞干燥就会受到损伤，双葡基海藻糖起到很有效的保护作用，因此对于干燥、老化的皮肤有很好的修复作用。此外，它还有抗炎症的作用：炎症是诱发皮肤问题的主要原因，微生物、紫外线照射、病毒感染等原因都会穿过角化细胞，使得炎症因子之一的TNF-a因子增多，从而出现皮肤问题。双葡基海藻糖可以抑制TNF-a的产生，从而实现抗炎的作用。但目前缺乏绿色高效的双葡基海藻糖制备技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种双葡基海藻糖的制备方法，达到提高生产双葡基海藻糖效率目的。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种双葡基海藻糖的制备方法，包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。

通过采用上述技术方案：加入麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶，极大提高了双葡基海藻糖的生产强度，显著降低了生产双葡基海藻糖的时间，提高生产双葡基海藻糖效率，减少了双葡基海藻糖的生产成本和能耗。

本发明进一步设置为，所述麦芽四糖水解酶为如下M1）或M2）的蛋白质：

M1）氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；

M2）在SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽四糖水解酶功能的由M1）衍生的蛋白质；

所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶为下述S1）或S2）的蛋白质：

S1）氨基酸序列为SEQ ID No.3的蛋白质；

S2）在SEQ ID No.3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶功能的由S1）衍生的蛋白质。

本发明进一步设置为，所述双葡基海藻糖生产成套试剂还包括切支酶。

本发明进一步设置为，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽四糖水解酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽四糖水解酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。

本发明进一步设置为，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽寡糖海藻糖合成酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽寡糖海藻糖合成酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。

本发明进一步设置为，所述麦芽四糖水解酶基因为下述M11）-M13）中的任一种DNA分子：

M11）编码序列是SEQ ID No.2所示的cDNA分子或基因组DNA；

M12）在严格条件下与M11）限定的DNA分子杂交且编码所述麦芽四糖水解酶的cDNA分子或基因组DNA；

M13）与M11）或M12）限定的DNA分子具有75％以上的同一性且编码所述麦芽四糖水解酶的cDNA分子或基因组DNA；