[发明专利]一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法

说明书

本发明公开了一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法，在10.5℃水温条件下，在受精后的420～440分钟内，即胚胎发育的有效积温为4410～4620℃·min的范围内，在65～68.9Mpa静水压下进行压力休克处理，处理时间为5分钟，休克处理完毕后将受精卵移入至10～11℃的淡水中流水孵化。本发明的有益效果是操作简单、处理时间短、对受精卵的损伤较低，成活率高。

技术领域

本发明属于鱼类多倍体育种技术领域，涉及一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法。

背景技术

虹鳟(Onchorynchus mykiss)隶属鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)、大马哈鱼属(Onchorynchus)，因其性成熟个体体侧有一条宽而鲜艳的彩虹带而得名，英文名为rainbow trout，原产于北美地区，为典型的冷水性鱼类，是世界性重要经济养殖鱼类之一和水产遗传育种领域的重要研究对象。我国1959年开始引进和养殖虹鳟，由于长期的近亲繁殖以及缺乏系统的选育，导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害频发等问题，特别是近年来受进口大规格三文鱼的影响，小规格鲑鳟鱼在中国的市场价位很低，养鳟者只能进口不育的、大个体的全雌三倍体虹鳟发眼卵进行养殖以满足市场要求，因为我们目前不具备规模化生产全雌三倍体虹鳟的能力。可见，全雌三倍体虹鳟卵的规模化生产已成为虹鳟养殖业的瓶颈。

三倍体虹鳟雌性个体完全不育，避免了因性腺发育造成鱼体生长性能与肉质降低的风险，养殖效益较高；同时，不育的三倍体虹鳟逃逸到自然水域中不会形成种群，可以维持渔业生态环境的稳定，同时避免性腺成熟个体常有的死亡现象，具有市场与生态双重效益。目前，常用的鱼类多倍体诱导方法包括直接法，即采用生物法、物理法和化学法直接诱导三倍体鱼类，其中物理方法中的温度休克法和静水压法最为常用；间接法是指四倍体与二倍体杂交生产三倍体的诱导方法，间接法要求获得一定数量的四倍体虹鳟群体，相比于直接法诱导虹鳟三倍体，间接法可以持续稳定地进行100％三倍体虹鳟苗种生产；鱼类四倍体的诱导方法又包括化学方法和物理方法，化学方法使用的药物有秋水仙素、细胞松弛素B和聚乙二醇等；国内外多采用温度休克法诱导虹鳟四倍体，该方法优点是处理设备简单易于装备，缺点是对卵的伤害严重，且并不稳定，四倍体诱导率低。与热休克法相比，静水压法对受精卵的刺激相对较小，处理时间较短，也更加稳定，效果优于热休克。然而，目前我国仍然没有形成较为成熟的虹鳟多倍体诱导技术体系。

因此，基于上述的问题，本发明提供一种四倍体虹鳟制种技术方法，通过静水压法提高四倍体虹鳟诱导率、存活率，并建立我国自己成熟稳定的多倍体虹鳟优质苗种生产体系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法，本发明的有益效果是在人工授精后对虹鳟受精卵实施静水压处理，阻止了受精卵第一次卵裂过程，成功得到四倍体虹鳟苗种。本发明建立了采用静水压生产虹鳟四倍体的方法，确定了四倍体虹鳟诱导的适宜起始时间、压力大小和持续时间等参数；并建立了四倍体鱼苗鉴定的方法。该方法操作简单、处理时间短、对受精卵的损伤较低，成活率高。

本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：

步骤1，对雌、雄虹鳟分别进行人工采卵、采精，将卵子采集到盛有单盐等渗液的塑料盆中，精液采到干燥的塑料盆中，使用雌、雄亲鱼数量比例为2:1；

步骤2，人工授精，将精液倒入到盛有卵子的塑料盆中，用羽毛轻轻搅拌15～20秒使精卵混合均匀，并开始计时，作为受精的起点；

步骤3，静置3～5分钟充分受精后，加少许清水多次洗卵，洗卵过程中尽可能去除过量的精液、未受精的死卵和血块等杂物；

步骤4，对受精卵实施10.5℃冷流水吸水膨胀；

步骤5，待受精后420～440分钟时，实施梯度升压法，即将受精卵倒入自制的塑料小桶内，提前一分钟放入盛有清水的加压室内，每加压10Mpa，暂停10秒，以减少压力对受精卵的损伤；