[发明专利]一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法

权利要求书

1.一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法，其特征在于按照以下步骤进行：

步骤1，对雌、雄虹鳟分别进行人工采卵、采精，将卵子采集到盛有单盐等渗液的塑料盆中，精液采到干燥的塑料盆中，使用雌、雄亲鱼数量比例为2:1；

步骤2，人工授精，将精液倒入到盛有卵子的塑料盆中，用羽毛轻轻搅拌15～20秒使精卵混合均匀，并开始计时，作为受精的起点；

步骤3，静置3～5分钟充分受精后，加少许清水多次洗卵，洗卵过程中尽可能去除过量的精液、未受精的死卵和血块等杂物；

步骤4，对受精卵实施10.5℃冷流水吸水膨胀；

步骤5，待受精后420～440分钟时，实施梯度升压法，即将受精卵倒入自制的塑料小桶内，提前一分钟放入盛有清水的加压室内，每加压10Mpa，暂停10秒，以减少压力对受精卵的损伤；

步骤6，实施65～68.9Mpa的压力大小、持续时间5分钟，阻止受精卵第一次卵裂过程，诱导产生四倍体受精卵；

步骤7，实施梯度降压，即每降压10Mpa，暂停10秒；

步骤8，实施冷流水10.5℃孵化至孵化积温达220度日，胚胎出现黑色眼点，在此期间孵化室内进行遮光处理，保证受精卵在孵化阶段所需要的暗光条件，并减少对卵的震动，每周使用甲基蓝对受精卵进行杀菌处理；

步骤9，实施冷流水10.5℃至孵化积温达600度日仔鱼孵化出膜；

步骤10，在流水环境下对初浮仔鱼实施开食驯饲30天，育成四倍体稚鱼。

2.按照权利要求1所述一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法，其特征在于：水温为恒定的10.5℃，温差在±0.5℃。

3.按照权利要求1所述一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法，其特征在于：所述四倍体鱼苗采用流式细胞仪进行四倍体虹鳟的倍性鉴定，采用正常二倍体虹鳟作对照，通过分析红细胞细胞核中相对DNA含量确定倍性，四倍体虹鳟红细胞的DNA含量为二倍体的2.0倍。