[发明专利]一种共培养肝细胞和肝窦内皮细胞的技术方法及其应用

权利要求书

1.一种共培养肝细胞系与肝窦内皮细胞系的方法，其特征在于：将肝窦内皮细胞系进行缺氧培养一定时间，然后收获肝窦内皮细胞系，与肝细胞系以一定比例进行共培养。

2.权利要求1所述的共培养方法，其中所述的缺氧培养是将肝窦内皮细胞系在氧浓度≤3％的环境中进行培养，实现氧浓度≤3％的环境的方法包括但不局限于使用三气培养箱、可商业获得的缺氧装置、或密闭容器中通入95％氮气和5％二氧化碳的混合气体。

3.权利要求1所述的共培养方法，其中所述缺氧时间是3-24小时，优选6-12小时。

4.权利要求1所述的共培养方法，其中所述共培养的肝细胞系和肝窦内皮细胞系可以是任何哺乳动物来源，其中肝细胞系可以是来源于正常肝细胞也可以是来源于肝脏肿瘤的细胞系。

5.权利要求1所述的共培养方法，其中所述共培养体系中肝细胞系和肝窦内皮细胞系的比例为1∶0.25～1∶4，优选肝细胞系和肝窦内皮细胞系的比例为1∶0.5～1∶2。

6.权利要求1所述的共培养方法，其中所述共培养的方式可以是平面培养也可以是三维立体培养；平面培养包括但不限于使用细胞培养瓶、培养皿、细胞工厂；三维立体培养包括但不局限于微载体培养、三维支架培养、凝胶培养。

7.权利要求1所述的共培养方法，其中所述共培养的起始方式可以是将两种细胞分别收获后按照所述比例混匀后接种，也可以是将肝窦内皮细胞系收获后制备成单细胞悬液，加入到生长有肝细胞系的培养体系中。

8.权利要求1-7所述的肝细胞系和肝窦内皮细胞系共培养方法的应用，其包括但不局限于利用共培养的肝细胞系和肝窦内皮细胞系进行药物筛选或制备生物人工肝。