[发明专利]一种塞内卡病毒的纯化浓缩方法

说明书

本发明公开了一种塞内卡病毒的浓缩方法，包括塞内卡病毒液预处理，及预处理后的浓缩；所述浓缩依次经过过滤浓缩、洗滤、过滤浓缩。本发明涉及一种可适用于大规模工业化生产的SVV抗原浓缩纯化方法。该方法采用切向流过滤及洗滤相结合的方式对SVV抗原进行浓缩纯化，具有操作方便，易于放大，过程温和、稳定，抗原回收率高等特点。该方法可用于活病毒和灭活病毒的浓缩纯化，抗原回收率80％，蛋白去除率90％，可制备出纯化SVV抗原或为后续抗原进一步精细纯化提供原料。

技术领域

本发明涉及制备病毒疫苗的技术领域，特别是涉及一种塞内卡病毒的纯化浓缩方法。

背景技术

塞内卡病毒(Seneca Valley virus，SVV)，又叫做Seneca virus A(SVA)，是无囊膜的单股正链RNA病毒，是小RNA病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Sene-cavirus)的唯一成员，是近年来新发现的一种能引起猪水泡样症状的病毒，被认为是引起猪原发性水疱病(PIVD)的主要原因。该病毒感染动物(尤其是猪)后,可引起繁殖母猪和公猪的鼻吻、冠状带和蹄部出现水疱性病变，偶见腹泻症状，成年猪感染通常呈亚临床感染。更可怕的是，该病毒会引起新生仔猪的死亡，1-3日龄新生仔猪病死率可达30％-70％。猪被该病毒感染后，在临床上其发病症状与口蹄疫、猪水疱病和猪水泡性口炎很难区分，往往会因诊断不及时而耽误治疗。

自20世纪80年代后期以来，美国猪群中便存在SVV。自2002年确定SVV病毒存在至2015年初，SVV感染的猪病例只有在美国和加拿大零星发生。但自2015年下半年后，在巴西、美国、加拿大、中国、哥伦比亚等多国相继发生了SVV感染的疫情，并且呈蔓延之势。截至2015年9月底,美国已有11个州确诊猪SVV感染病例,加拿大、意大利和巴西出现疑似SVV感染病例。

猪SVV作为近两年在全球多地出现的一种跨境动物疾病病毒，已经对多国养殖业造成了不同程度的影响。特别是随着规模化养猪的不断发展和强毒株的出现，猪塞内卡病毒感染和流行日趋严重。我国作为养猪大国，生猪养殖总量约为全球50％，因此，有必要对SVV流行态势密切关注并尽快建立全方位的应对措施。目前，我国对SVV的报道并不多，大多养殖户对该病没有引起足够的重视，目前尚无针对猪塞内卡病毒感染的有效治疗药物及疫苗，主要依靠隔离感染猪群、淘汰隐性感染动物控制猪塞内卡病毒的蔓延。但该病已经形成全球蔓延的趋势，一旦大规模爆发，势必会造不可估量的经济损失。

因此，研制该病毒的疫苗是预防该病毒大规模蔓延的最主要途径之一。为获得高抗原含量的疫苗，从而发挥更强的预防功效，病毒疫苗的制备过程中关键环节之一为病毒的纯化和浓缩，因此，需要寻找一种有效的方法对塞内卡病毒进行纯化和浓缩。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，提供一种快速提纯及浓缩塞内卡病毒的方法，包括塞内卡病毒液预处理，及预处理后的浓缩；所述浓缩依次经过病毒液过滤浓缩、洗滤、残留病毒液过滤浓缩。

所述塞内卡病毒液预处理是将塞内卡病毒液(弱毒或强毒)在10000-12000rpm/min下离心20-30min，上清即为病毒液。

所述塞内卡病毒液预处理是将塞内卡病毒液(弱毒或强毒)经筒式过滤器或深层滤膜(0.2μm≤滤膜孔径≤0.65μm)过滤澄清，得到的滤出液即为病毒液。

所述浓缩是按所需浓缩倍数将预处理后的病毒液用中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统进行切向流过滤浓缩，使用PBS溶液进行洗滤，使用PBS溶液流经所述系统收集残留病毒液，从所述系统透过端合并收集的病毒液即为塞内卡病毒浓缩液。

所述系统孔径为400-750Kd。

所述系统的透过端流速为2-4L/min。

所述系统的进口压力≤0.1MPa，跨膜压差≤0.1MPa。