[发明专利]一种塞内卡病毒的纯化浓缩方法

权利要求书

1.一种塞内卡病毒的纯化浓缩方法，其特征在于，包括塞内卡病毒液预处理，及预处理后的浓缩；所述浓缩依次经过病毒液过滤浓缩、洗滤、残留病毒液过滤浓缩。

2.根据权利要求1所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述塞内卡病毒液预处理是将塞内卡病毒液(弱毒或强毒)在10000-12000rpm/min下离心20-30min，上清即为病毒液。

3.根据权利要求1所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述塞内卡病毒液预处理是将塞内卡病毒液(弱毒或强毒)经筒式过滤器或深层滤膜(0.2μm≤滤膜孔径≤0.65μm)过滤澄清，得到的滤出液即为病毒液。

4.根据权利要求2或3所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述浓缩是按所需浓缩倍数将预处理后的病毒液用中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统进行切向流过滤浓缩，使用PBS溶液进行洗滤，使用PBS溶液流经所述系统收集残留病毒液，从所述系统透过端合并收集的病毒液即为塞内卡病毒浓缩液。

5.根据权利要求4所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述系统孔径为400-750Kd。

6.根据权利要求4或5所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述系统的透过端流速为2-4L/min。

7.根据权利要求4-6任一所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述系统的进口压力≤0.1MPa，跨膜压差≤0.1MPa。

8.根据权利要求4-7任一所述纯化浓缩方法，其特征在于，洗滤过程中PBS溶液的浓度为40mmol/L，pH＝7.5-7.6，流速为2-4L/min。

9.根据权利要求1-8任一所述纯化浓缩方法，其特征在于，浓缩倍数为10倍以上，单次处理塞内卡病毒液100L以上，优选200L-600L。

10.根据权利要求1-9任一所述纯化浓缩方法，其特征在于，所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统在使用前包括除菌平衡、完整性检测；

优选的，所述除菌平衡是用NaOH溶液循环清洗中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统30-60min，清洗后将中空纤维或超滤膜包在NaOH溶液中浸泡过夜，完成除菌平衡；

优选的，所述完整性检测是先将除菌平衡后的中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统用纯化水清洗至洗出液的pH值≤7.0，再向所述系统施加0.08-0.1MPa压力的洁净压缩空气，若1min内无持续气泡逸出，说明完整性合格，备用；最后用PBS溶液(pH＝7.5-7.6)清洗完整性合格的所述系统至洗出液的pH值≤7.5，备用；

优选的，所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统在使用之后包括原位消毒，具体为：用0.5mol/L的NaOH溶液循环清洗所述系统30min，清洗后将中空纤维或超滤膜包在NaOH溶液中浸泡保存。