[发明专利]一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清培养基

说明书

本发明公开了一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清培养基，由氨基酸、维生素、无机盐及其它添加物组成，不含动物源组分，成分明确。本发明根据细胞体外生长的营养需求选择不同营养物质以替代动物血清所发挥的作用，并对不同营养物质的比例进行了合理调整。不需要补充血清也可以维持高密度悬浮培养HEK293细胞，使其能够维持正常的形态，分散不结团，同时保持正常的生长速度，利于外源基因的转染和表达，可以包装出较高滴度的慢病毒。

技术领域

本发明涉及一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清培养基，属于细胞工程技术领域。

背景技术

细胞培养基是决定细胞体外生长代谢最重要、最直接的环境因素。目前大多数合成细胞培养基均需要补充动物血清才能支持细胞的体外生长、增殖，而动物血清的使用带来了动物性病原微生物污染培养物的可能，因此推动了动物细胞无血清培养基的发展。

HEK293细胞为目前大规模瞬时基因表达最常用宿主细胞之一，由加拿大McMaster大学F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。HEK293细胞是经5型腺病毒75株系转化、含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系。作为E1区缺陷互补细胞系，它可持续表达E1A和E1B基因。

为了使HEK293细胞能够大规模应用于瞬时转染，将其驯化为悬浮生长，而悬浮培养过程中HEK293细胞极易结团，细胞团直接影响细胞活性，导致HEK293细胞无法高密度扩增、连续传代。

现有技术中，进口品牌HEK293悬浮培养无血清培养基配方保密且价格高，还存在着培养效果不佳、成分均不明确等问题。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清培养基，根据细胞体外生长的营养需求选择不同营养物质以替代动物血清所发挥的作用，并对不同营养物质的比例进行了合理调整，添加抗剪切力物质和抗结团物质，实现了不需要补充血清也可以维持高密度悬浮培养HEK293细胞，使其能够维持正常的形态，分散不结团，保持正常的生长速度。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清培养基，由基础培养基包括的组分、血清替代组分和抗结团物质F68组成的，各物质浓度单位为mg/L：

甘氨酸10～50；

L-丙氨酸2～10；

L-精氨酸盐酸盐50～200；

L-天冬酰胺5～20；

L-天冬氨酸5～20；

L-半胱氨酸盐酸盐10～50；

L-胱氨酸盐酸盐20～50；

L-谷氨酰胺300～500；

L-谷氨酸5～10；

L-组氨酸盐酸盐20～50；

L-异亮氨酸50～100；

L-亮氨酸50～100；

L-赖氨酸盐酸盐50～200；

L-蛋氨酸10～50；

L-苯丙氨酸20～50；

L-脯氨酸10～50；

L-丝氨酸20～50；

L-苏氨酸50～100；

L-色氨酸5～20；

L-酪氨酸50～100；

L-缬氨酸50～100；