[发明专利]用于检测人类线粒体DNA删除突变及耗竭的引物对、试剂盒及其方法在审
| 申请号： | 201811339542.6 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109371119A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 陈红星;崔英祥;魏琳力 | 申请（专利权）人： | 北京纳诺基生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 严诚 |
| 地址： | 100000 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人类线粒体DNA 引物 删除 突变 线粒体DNA 原点 重链 检测 复制 试剂盒 线粒体 扩增 反向引物 分子检测 邻近区域 正向引物 灵敏度 种检测 长程 漏检 覆盖 | ||
1.用于检测人类线粒体DNA删除突变及耗竭的引物对，其特征在于，所述引物对的正向引物位于线粒体重链复制原点的正负300bp范围内，反向引物位于线粒体重链复制原点区段内；
进一步地，所述引物对的核酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
2.用于检测人类线粒体DNA删除突变及耗竭的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、用于大片段扩增的DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水中的任一种或几种。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述用于大片段扩增的DNA聚合酶为PrimeSTAR GXL聚合酶或PrimeSTAR Max DNA聚合酶。
5.人类线粒体DNA删除突变及耗竭的检测方法，其特征在于，待检测线粒体基因组作为模板，以权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，得到的产物进行电泳检测，判断所述待检测线粒体基因组的类型。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述待检测线粒体基因组来自待检测物的组织或细胞。
7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述待检测线粒体基因组在PCR扩增体系中的浓度不低于0.5ng/μl。
8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，PCR扩增体系为20-75μl。
9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，PCR扩增的程序为：95-98℃，10-15s；60℃，15s；68℃，5-6min；上述程序共25-35个循环。
10.根据权利要求5-9任一项所述的检测方法，其特征在于，检测时的样本还包括正常线粒体基因组，通过待检测线粒体基因组与正常线粒体基因组的扩增结果比对，判断所述待检测线粒体基因组的类型；
进一步地，所述电泳检测为：采用琼脂糖凝胶电泳，电泳完成后，抓取条带信息；
进一步地，所述抓取条带信息采用凝胶成像仪和Gel-Pro Analyzer软件完成。
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