[发明专利]一种多杀菌素的提取方法

权利要求书

1.一种多杀菌素的精制方法，所述方法包括以下步骤：

1)将发酵液的pH调节至8.5-9.5，得到预处理的发酵液；

2)将步骤1)得到的预处理的发酵液过滤并收集滤饼；

3)将步骤2)得到的滤饼使用甲醇-水溶液搅拌浸提，过滤得到浸提液；

4)将步骤3)得到的浸提液过强碱性阴离子树脂柱脱色并浓缩至无甲醇流出，得到脱色浓缩液；

5)在步骤4)得到的脱色浓缩液中加入非水溶性有机溶剂萃取，萃取条件为：有机溶剂与多杀菌素浓缩液的体积比为1:1-3，温度20-40℃，pH为7-10，萃取时间5-15min，萃取完成分层后，收集负载有机相；

6)向步骤5)得到的负载有机相中加入酸水反萃取，反萃取条件为：负载有机相与酸水的体积比为1-2:1，酸水浓度为0.2-0.5mol/L，温度15-35℃，反萃取时间为5-15min，反萃取分层完成后，收集反萃取相；

7)搅拌状态下，调节步骤6)得到的反萃取相至pH为9.0-10.0，使多杀菌素以结晶形式沉淀出来，过滤，烘干，得到多杀菌素粉末；

8)将步骤7)得到的多杀菌素粉末用水溶性有机溶剂溶解，升温至50-60℃，溶清后，在搅拌状态下滴加纯化水，在15-20℃下，缓慢降温析晶，过滤，得到多杀菌素精制结晶粉，并且多批收集结晶母液；

9)将步骤8)得到的结晶粉用低极性非水溶性有机溶剂溶解，得到上柱液；

10)将步骤9)得到的上柱液和步骤8)收集的结晶母液分别上硅胶柱，层析分离，洗脱溶剂为石油醚/乙酸乙酯或石油醚/丙酮，洗脱过程用HPLC监控层析液中多杀菌素A和多杀菌素D的纯度，分段收集多杀菌素A和多杀菌素D的层析液；

11)将步骤10)得到的多杀菌素A的层析液合并，多杀菌素D层析液合并，分别浓缩至干，分别得到多杀菌素A和多杀菌素D的固体粉末。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，使用1-2M的氢氧化钠溶液调节pH值。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，将预处理的发酵液使用助滤剂过滤。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述助滤剂为珍珠岩。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述珍珠岩的使用量为15-20kg珍珠岩/m³发酵液。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，使用板框压滤机过滤。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中，所述甲醇-水溶液中的甲醇与水的体积比为2-5:1。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中，所述甲醇-水溶液中的甲醇与水的体积比为4:1。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中，所述搅拌浸提的时间不少于3小时。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中，所述滤饼与甲醇-水溶液的质量/体积(kg/L)为1:6-8。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤4)中，所述强碱性阴离子树脂为A850强碱阴离子脱色树脂或201×7强碱阴离子树脂。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤4)中，所述过柱的浸提液体积为树脂体积的10-20倍。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤5)中，所述非水溶性有机溶剂为乙酸丁酯或者正庚烷。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤6)中，所述酸水为酒石酸水溶液。