[发明专利]一种用于非小细胞肺癌诊断的外周血miRNA标志物

说明书

本发明公开了一种用于非小细胞肺癌诊断的外周血miRNA标志物，所述外周血miRNA标志物包括hsa‑miR‑1291、hsa‑miR‑1‑3p、hsa‑miR‑214‑3p中至少一种。本发明基于大量样本验证，明确3个适用于中国人群非小细胞肺癌的特异性诊断标志物，相对国际上报道的其它miRNA标志物，具备有更高的人群特异性；这3个miRNA诊断标志物均为首次提出，相较于其他miRNA分子标志物更可靠。

技术领域

本发明涉及疾病早期检测技术领域，特别涉及一种用于非小细胞肺癌诊断的外周血miRNA标志物。

背景技术

肺癌是全世界范围内肿瘤死亡的首要原因，2016年中国癌症中心发布的统计显示，在429万新发癌症病人群中，肺癌是73.3万；在280万的癌症死亡人数中，肺癌占据了其中的61万，是我国名副其实的“第一癌症”。其中，非小细胞肺癌约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。因为肺癌早期症状不明显，75％的肺癌患者就诊时已有局部浸润和远处转移，失去了手术治疗的机会，而目前的治疗手段对肺癌总生存率的提高效果不大，II-IV期肺癌患者5年生存率大约在40％-5％之间，而I期患者5年生存率可高达92％。因此，加强对高危人群的筛查，提高早诊、早治率是减少肺癌死亡率的最有效方法。

X胸片和痰涂片是肺癌筛查最常规的技术，但其敏感性太低；纤支镜刷检或活检能直接窥视病灶，能病理定性，但有创，难以在大样本人群中推广；低剂量螺旋CT是目前被认为最有效的肺癌筛查技术，无创、敏感性高，然而有高达96.4％的假阳性率，而且筛查的成本比较高。因此需要开发新的微创、经济、敏感性和特异性均比较高的早期筛查的技术。

微小核酸(microRNA，miRNA)是近年来发现的一类长度为19—25个核苷酸的非编码小分子RNA。它主要通过与靶标基因3'UTR的完全或不完全配对,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译,从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动，在肿瘤的发生和发展过程中发挥着类似于致癌基因或抑癌基因的功能。miRNA的表达谱具有明显的组织特异性,在不同肿瘤中具有特定的表达模式。这些特点使得miRNA有可能成为肿瘤诊断新的生物学标记和治疗靶标。同已知的循环核酸(DNA和RNA)一样,miRNA广泛存在于肺癌高危健康人和肿瘤患者的血清中,其种类和数量会随着生理状况和病程变化而改变。循环miRNA可能来自于凋亡或坏死的细胞，或者是细胞的主动释放和循环细胞的裂解。这些内源循环miRNA分子多数不是以游离形式存在,而是与蛋白等构成颗粒,因而内源性的循环RNA分子具有良好的抗RNase降解能力,有较高的稳定性。这一特性为循环miRNA作为生物标志物进行检测提供了可能。

许多研究报道了miRNA在肺癌中的异常表达，尽管现有的研究发现了许多非常有前景的肺癌早期诊断血清miRNA，但由于检测对象包含组织，血清，血浆等，检测方法包含测序法，扩增法，杂交法等，研究中入组样本的选取不严格；各种因素缺乏一致性，导致非小细胞肺癌的miRNA标志物没有统一的定论，这些结果并不一致，并且不能相互验证，最终能用于肺癌筛查的血清miRNA生物标志物以及生物标志物组合标志物还未见定论。

其中最关键的原因有以下两点：

1、病例和对照样本的选取、收集、保存过程中出现偏差。样本的类别不同，必然会对生物标志物的研发、验证带来不确定性。外周血中变化的miRNA主要是由肺癌相关细胞分泌到细胞外的，其组成成分与细胞内或者全血样本中必然不同，同时也会受到其他因素的影响，例如是否经过治疗等。大多数miRNA是稳定的存在于健康人群以及癌症人群的外周血中的，并由身体各种组织细胞分泌，各类环境、遗传等非癌症因素，均会影响其表达量。为了排除影响，需要选取大量的人群样本作为研发、验证，以确定生物标志物的真实性。同时，已有研究证明，通过使用不同方法分离、储存的外周血样本，其生物标志物含量也会有所不同。通过癌症组织细胞找到的生物标志物、通过对比晚期癌症找到的生物标志物、通过对比使用不同方法分离、保存的样本找到的生物标志物以及没有经过大量样本研发、验证过的生物标志物，都可能是假阳性的结果，不一定能经得起大规模实验的验证。