[发明专利]阳离子交换层析法纯化抗体的方法

说明书

本发明涉及抗体纯化技术领域，尤其是涉及一种阳离子交换层析法纯化抗体的方法。所述方法包括如下步骤：对抗体溶液进行阳离子交换层析处理，调节抗体溶液的pH为5.0‑7.0、电导率为3‑20mS/cm进行上样，平衡缓冲液的pH为5.0‑7.0、电导率为3‑20mS/cm，采用流穿模式或过载模式进行纯化。本发明利用阳离子交换层析法纯化抗体，调节抗体溶液和平衡缓冲液的pH和电导率，使目标抗体单体不能或极少量与阳离子层析柱或膜结合，随流穿液流出，而杂质成分能够与层析柱或膜结合，以达到抗体纯化的目的；同时抗体的得率可达到90％以上。

技术领域

本发明涉及抗体纯化技术领域，尤其是涉及一种阳离子交换层析法纯化抗体的方法。

背景技术

目前，已经有上百种单克隆抗体药物上市以及处于研发阶段，人们对生物制药的兴趣也越发浓厚。低毒副作用、高特异性治疗功效、较长的半衰期和平台化的生产工艺技术等特点，使单抗在治疗生物制品领域处于领导地位，是最成功的一类生物制品。迄今，大部分的单抗都是由哺乳动物细胞表达的，具有很高的同源性以及相似的分子特性。这些相似特性被很多公司及研究机构开发成平台化技术以达到只做少量的技术改变与优化便可对大量处于临床早期阶段不同类抗体进行高效纯化，随着项目进展到临床后期及商业化阶段，需要针对细胞培养的改变，抗体滴定的增加，生产设备的更新等做进一步工艺优化与开发，并且提高产量，降低商业成本。

抗体药物制造工艺从研发时期的细胞株构建、培养基优化、上游细胞培养、下游纯化到最后制剂这五个方面的任何一个环节都对抗体药物有很重要的影响，其中又以下游纯化工艺最为复杂繁琐。

如今下游纯化工艺形成的平台技术主要为通过蛋白A亲和层析对培养液中抗体进行捕获，随后一至两步精制步骤，如离子交换层析、疏水层析、混合模式层析。宿主细胞蛋白、宿主细胞DNA、多聚体、病毒等杂质在精纯过程中会被降到法规允许的水平。

传统的纯化步骤均通过蛋白A亲和层析、阳离子交换层析、疏水层析以及混合模式层析的结合洗脱模式进行。存在填料载量低即单次循环处理料液量低，操作时间长，填料利用率低等缺点。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种阳离子交换层析法纯化抗体的方法，以解决现有技术中存在的填料载量低，操作时间长，填料利用率低的技术问题，该纯化方法通过阳离子交换层析法提高了对HCP、多聚体的去除能力，节省工艺操作时间，降低成本。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

阳离子交换层析法纯化抗体的方法，包括如下步骤：

对抗体溶液进行阳离子交换层析处理，调节抗体溶液的pH为5.0-7.0、电导率为3-20mS/cm进行上样，平衡缓冲液的pH为5.0-7.0、电导率为3-20mS/cm，采用流穿模式或过载模式进行纯化。

本发明利用阳离子交换层析法纯化抗体，调节抗体溶液和平衡缓冲液的pH和电导率，使目标抗体单体不能或极少量与阳离子层析柱或膜结合，随流穿液流出，而杂质成分能够与层析柱或膜结合，以达到抗体纯化的目的；同时抗体的得率可达到90％以上。

并且，流穿模式和过载模式的操作流速快，减少步骤时间；过载模式和流穿模式具有更高的可用结合载量，并且有较少的洗涤和洗脱步骤，单循环样品处理量显著增加，填料及膜耗材减少，提高利用率，降低成本。结合洗脱模式，填料载量低，单次循环处理料液量低，操作时间长，填料利用率低；本发明相较于结合洗脱模式，处理量增加，填料利用率高。

本发明中，抗体溶液的pH为5.0-7.0，在此范围内任意选择，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0等等。