[发明专利]一种去细胞神经移植物及其制备方法

说明书

本发明公开一种去细胞神经移植物，为一种去细胞异种神经支架，含有可引导神经再生的保存完好的神经纤维神经基底膜管的三维取向性结构，该结构去除了引起免疫反应的细胞、髓鞘、轴突及脂肪的成分。本发明还公开一种去细胞神经移植物的制备方法，步骤包括：在无菌条件下获得哺乳动物周围神经，并在无菌条件下剥离并剔除神经周围的脂肪和结缔组织；将经上述处理后的神经反复冻融处理，再采用化学萃取和超声联合的方法进行去细胞，经生理盐水清洗后加入脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶溶液，获得初始去细胞神经移植物；对上述初始去细胞神经移植物进行冷冻燥，再进行超临界二氧化碳萃取脂肪处理，经灭菌处理后得到去细胞神经移植物。

技术领域

本发明设计医用生物材料，特别涉及一种联合化学和物理方法制备的去细胞神经移植物及其制备方法。

背景技术

周围神经损伤以及损伤所致的神经缺损是在临床工作中常见的疾病，其不但对患者的生活造成了严重的影响，同时带来了巨大的社会经济负担。对于存在缺损的周围神经损伤，在无法进行减张缝合的情况下，自体神经移植仍是治疗的金标准。然而自体神经来源有限，且对患者造成二次损伤，故对于较长距离的神经损伤，组织工程神经和去细胞神经移植物的应用是一种趋势。

目前应用于修复神经损伤的组织工程神经移植物仍以管腔中空的导管为主，无法精确模仿正常神经的三维空间结构及各组分比例。去细胞神经支架在保留天然神经三维结构的同时，去除了细胞、髓鞘和轴突等成分，显示出良好的临床应用前景，然而同种异体去细胞神经的来源仍相对有限。因此，研究者将目光转向了异种去细胞神经支架，为了获得符合临床应用标准的异种去细胞神经支架，需对粗大神经的去细胞方法进行探索。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种去细胞神经移植物，其为去除了细胞、髓鞘、轴突及脂肪等成分的异种神经移植物。

本发明的另一个目的是提供联合化学和物理方法的一种去细胞神经移植物的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种去细胞神经移植物，为一种去细胞异种神经支架，含有可引导神经再生的保存完好的神经纤维神经基底膜管的三维取向性结构，该结构去除了引起免疫反应的细胞、髓鞘、轴突及脂肪的成分。

一种去细胞神经移植物的制备方法，步骤包括：

在无菌条件下获得哺乳动物周围神经，并在无菌条件下剥离并剔除神经周围的脂肪和结缔组织；

将经上述处理后的神经反复冻融处理，再采用化学萃取和超声联合的方法进行去细胞，经生理盐水清洗后加入脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶溶液，获得初始去细胞神经移植物；

对上述初始去细胞神经移植物进行冷冻燥，再进行超临界二氧化碳萃取脂肪处理，经灭菌处理后得到去细胞神经移植物。

进一步地，所述哺乳动物周围神经包括坐骨神经、胫神经、尺神经、面神经；优选地，选用成年约克猪的坐骨神经。

进一步地，所述冻融处理的方法为将处理后的神经反复冻融1-5次，每次于-20℃至-80℃下冷冻0.5-24h，恢复室温下处理1-24h；优选地，反复冻融3次，每次于-80℃下冷冻3h，恢复室温下处理1h。

进一步地，所述化学萃取的方法为将经过处理的神经在0-8℃下用0.1％-5％十二烷基磺酸钠(SDS)萃取液于定轨摇床中震荡处理12-96h；优选地，在4℃条件下用0.5％的十二烷基磺酸钠(SDS)萃取液于定轨摇床中震荡处理48h。

进一步地，所述超声的方法为将经过处理的神经在0-8℃下于超声仪中间歇处理1-20次，每次1-10min，频率为1000-80000HZ；优选地，在4℃条件下于超声仪中间歇处理3次，每次3min，频率为50000HZ。