[发明专利]一种去细胞神经移植物及其制备方法

权利要求书

1.一种去细胞神经移植物，其特征在于，为一种去细胞异种神经支架，含有可引导神经再生的保存完好的神经纤维神经基底膜管的三维取向性结构，该结构去除了引起免疫反应的细胞、髓鞘、轴突及脂肪的成分；

所述去细胞神经移植物通过一种去细胞神经移植物的制备方法制备得到，该方法的步骤包括：

在无菌条件下获得哺乳动物周围神经，并在无菌条件下剥离并剔除神经周围的脂肪和结缔组织；

将经上述处理后的神经反复冻融处理，再采用化学萃取和超声联合的方法进行去细胞，化学萃取的方法为将经过处理的神经在0-8℃下用0.1％-5％十二烷基磺酸钠萃取液于定轨摇床中震荡处理12-96h，经生理盐水清洗后加入脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶溶液，获得初始去细胞神经移植物；

对上述初始去细胞神经移植物进行冷冻燥，再进行超临界二氧化碳萃取脂肪处理，超临界二氧化碳萃取脂肪处理是指在超临界二氧化碳萃取仪中于-5-65℃和1-6Mpa下进行脂肪萃取处理1-8h，经灭菌处理后得到去细胞神经移植物。

2.一种去细胞神经移植物的制备方法，其特征在于，步骤包括：

在无菌条件下获得哺乳动物周围神经，并在无菌条件下剥离并剔除神经周围的脂肪和结缔组织；

将经上述处理后的神经反复冻融处理，再采用化学萃取和超声联合的方法进行去细胞，化学萃取的方法为将经过处理的神经在0-8℃下用0.1％-5％十二烷基磺酸钠萃取液于定轨摇床中震荡处理12-96h，经生理盐水清洗后加入脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶溶液，获得初始去细胞神经移植物；

对上述初始去细胞神经移植物进行冷冻燥，再进行超临界二氧化碳萃取脂肪处理，超临界二氧化碳萃取脂肪处理是指在超临界二氧化碳萃取仪中于-5-65℃和1-6Mpa下进行脂肪萃取处理1-8h，经灭菌处理后得到去细胞神经移植物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物周围神经包括坐骨神经、胫神经、尺神经、面神经。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述冻融处理的方法为将处理后的神经反复冻融1-5次，每次于-20℃至-80℃下冷冻0.5-24h，恢复室温下处理1-24h。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声的方法为将经过处理的神经在0-8℃下于超声仪中间歇处理1-20次，每次1-10min，频率为1000-80000HZ。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，将去细胞后的神经在0-8℃下用无菌生理盐水于定轨摇床中震荡清洗24-120h，每隔4-20h更换一次生理盐水；将生理盐水清洗后的神经用脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶溶液于37℃下处理2h以上，再重复用生理盐水进行清洗。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述冷冻燥的方法为将初始去细胞神经移植物于-20℃预冷2-24h，再置于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12-96h。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述灭菌处理的方法为进行剂量为15-20KGy的钴60产生的γ射线辐照灭菌处理后真空无菌包装。