[发明专利]一种检测芸薹种蔬菜叶缘裂刻性状的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种竞争性等位基因特异性PCR引物组，其特征在于：所述引物组由引物1、引物2和引物3组成；

所述引物1的具体序列为：

5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCACTAGACCTCCTCGTGCAG，如SEQ ID NO. 2所示；

其中，特异性部分为：

5’-CACTAGACCTCCTCGTGCAG，如SEQ ID NO. 3所示；

5’端第一接头序列为：

5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT，如SEQ ID NO. 4所示；

所述引物2的具体序列为：

5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTACACTAGACCTCCTCGTGCAA，如SEQ ID NO. 5所示；

其中，特异性部分为：

5’-TACACTAGACCTCCTCGTGCAA，如SEQ ID NO. 6所示；

5’端第二接头序列为：

5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT，如SEQ ID NO. 7所示；

所述引物3的具体序列为：

5’-GCTCAGGCAAGAGTACGAAGTTGTT，如SEQ ID NO. 8所示。

2.一种竞争性等位基因特异性PCR引物探针组合，其特征在于：所述引物探针组合由如权利要求1所述的引物组、F探针和H探针组成；

所述F探针的序列为：

5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT，如SEQ ID NO. 9所示；

所述F探针的5’端带有第一荧光基团；

所述H探针的序列为：

5’ - GAAGGTCGGAGTCAACGGAT，如SEQ ID NO. 10所示；

所述H探针的5’端带有第二荧光基团。

3.如权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于：所述第一荧光基团为FAM荧光基团。

4.如权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于：所述第二荧光基团为HEX荧光基团。

5.一种检测芸薹种蔬菜SNP分子标记的方法，所述方法为：

对芸薹种蔬菜Bra009510 基因进行竞争性等位基因特异性PCR检测；

其中，所述Bra009510 基因的模板链序列如SEQ ID NO.1所示；所述方法是使用如权利要求1所述的引物组进行的。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述竞争性等位基因特异性PCR检测的步骤包括：

S1：提取芸薹种蔬菜模板DNA；

S2：加样品：在微孔板中加入待测 DNA 模板，55-65°C 烘干；

S3：加液：向每个反应孔中加入Master mix；

S4：加引物探针组合：向每个反应孔中加入引物预混液、F探针和H探针，

其中引物预混液为权利要求1中所述引物1、引物2和引物3的混合液；

S5：封膜；

S6：扩增反应；和

S7：荧光信号分型。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述引物预混液中，引物1、引物2和引物3的摩尔浓度比为2:2:5。

8.一种试剂盒，所述试剂盒中含有如权利要求1所述的PCR引物组或如权利要求2-4任一项所述的引物探针组合。

9.如权利要求1所述的引物组、如权利要求2-4任一项所述的引物探针组合、如权利要求5-7任一项所述的方法或如权利要求8所述的试剂盒在如下A-D任一种中的应用：

A、在鉴别或辅助鉴别芸薹种蔬菜叶缘形状中的应用；

B、在选育叶缘裂刻芸薹种蔬菜品种中的应用；

C、在芸薹种蔬菜叶缘形状育种中的应用；

D、预测芸薹种蔬菜叶缘形状中的应用。