[发明专利]一种过表达CCR2的间质干细胞用于治疗急性缺血性脑卒中及其制备方法有效
| 申请号： | 201811328565.7 | 申请日： | 2018-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109439631B | 公开（公告）日： | 2021-02-09 |
| 发明（设计）人： | 项鹏;汪建成;黄一浓;李启豪;宋武 | 申请（专利权）人： | 广州赛隽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/11;A61K35/28;A61P9/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 孙凤侠 |
| 地址： | 510700 广东省广州市黄*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 ccr2 间质 干细胞 用于 治疗 急性 缺血性 脑卒中 及其 制备 方法 | ||
1.一种过表达CCR2的间质干细胞在制备治疗缺血性脑卒中的药物的用途，其特征在于：所述间质干细胞具有归巢定植到缺血脑组织的能力，以及分泌高水平的抗氧化蛋白PRDX4，用于降低活性氧水平的能力；
所述过表达CCR2的间质干细胞的制备方法包括如下步骤：
(1)构建表达CCR2的质粒；
(2)利用步骤(1)构建的质粒合成CCR2 mRNA；
(3)将步骤(2)合成的CCR2 mRNA转染间质干细胞，即得过表达CCR2的间质干细胞。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述过表达CCR2的间质干细胞的制备方法包括如下步骤：
（1）构建表达CCR2的质粒；具体包括：提取外周血单个核细胞RNA，逆转录成cDNA，利用CCR2特异性PCR引物，扩增出全长CCR2 cDNA，将PCR产物和质粒pcDNA 3.1经Kpn I和Sfu I双酶切后纯化，并将CCR2目的基因片段连接至pcDNA 3.1质粒，即得到表达CCR2的质粒；所述CCR2特异性PCR引物为上游引物: 5’-TTGGTACCTACGGTGCTCCCTGTCATAAA-3’，下游引物:5’-TTTTTCGAATAAGATGAGGACGACCAGCAT-3’；
（2）利用步骤（1）构建的质粒合成CCR2 mRNA；具体包括：
（2.1）将步骤（1）构建的质粒线性化，得线性质粒DNA；
（2.2）以步骤（2.1）得到的线性质粒DNA为模板，合成带有5′端帽子结构的CCR2 mRNA；
（2.3）对步骤（2.2）合成的带有5′端帽子结构的CCR2 mRNA进行加尾，即得CCR2 mRNA；
（3）将步骤（2）合成的CCR2 mRNA转染间质干细胞，即得过表达CCR2的间质干细胞。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，将所述过表达CCR2的间质干细胞制备用于治疗缺血性脑卒中的药物。
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