[发明专利]短短芽孢杆菌液体深层发酵方法及可湿性粉剂制备方法

说明书

本发明提供了一种短短芽孢杆菌的液体深层发酵方法，包括将短短芽孢杆菌种子液按体积比为1～5％的接种量接入发酵培养基中进行发酵，直至所得发酵液中90％以上菌体形态为芽孢。本发明还提供一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，包括将上述发酵液进行离心处理得到浓缩菌液，再将滑石粉、蔗糖、麦芽糊精与上述浓缩菌液混合均匀后进行喷雾干燥，得到干粉菌剂，将十二烷基苯磺酸钠、有机硅、抗坏血酸与上述干粉菌剂混合均匀后在30～50℃下粉碎，过400目筛后得到可湿性粉剂。该方法工艺简单，制备得到的生防短短芽孢杆菌可湿性粉剂对烟草黑胫病有较好的防效，且安全高效、无残留、无毒副作用，能够减少化学农药的使用。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，特别涉及一种短短芽孢杆菌液体深层发酵方法及可湿性粉剂制备方法。

背景技术

化学农药的大量使用，极易造成农药残留超标，生物富集，不仅污染生态环境，还影响人类的健康。微生物农药，是指应用活体微生物及其代谢产物对农业病虫害进行防治，其具有选择性强，副作用小，对人、畜、农作物和自然环境无害，不易产生抗药性等特点，因此是一种具有广阔前景的绿色农药。目前市场上已经有较为成熟的微生物农药产品，例如苏云金芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等。

短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)是应用得最为广泛的革兰氏阳性菌之一。短短芽孢杆菌属之前被归为芽孢杆菌属，后重新进行分类，归为短短芽孢杆菌属。研究表明，短短芽抱杆菌的许多菌株都对病原菌有抑制作用，有的通过和病原菌争夺营养和生态位，另一部分通过分泌抑菌活性物质来抑制病原菌的生长。之外，短短芽孢杆菌能够生产各种各样的抗真菌代谢物，可以控制多种植物病原土传真菌。近年来，短短芽孢杆菌的生物防治已经成为了研究热点。

当前，国内外对芽孢杆菌发酵工艺的研究主要集中在菌种筛选、抑菌效果和发酵产物分析中，缺乏对芽孢杆菌高产芽孢发酵优化研究。如何在保证成本条件下，尽可能提高芽孢产率与回收率与实际应用效果，成为困扰短短芽孢杆菌可湿性粉剂实际工业生产的瓶颈问题。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种短短芽孢杆菌液体深层发酵方法及可湿性粉剂制备方法，其目的是为了提高芽孢产率与回收率与实际应用效果。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种短短芽孢杆菌的液体深层发酵方法，包括：将短短芽孢杆菌种子液按体积比为1～5％的接种量接入发酵培养基中进行发酵，直至所得发酵液中90％以上菌体形态为芽孢；

其中，发酵温度为28～32℃，搅拌速度为160～200r/min，通气量为15～60 m³/h，发酵罐罐压为0.05～0.06Mpa。

进一步地，所述发酵培养基组成为：蔗糖糖蜜10～30g/L、黄豆粉5～15g/L、蛋白胨2～6g/L、MgSO₄0.5～3.5g/L和CaCO₃4～8g/L。

进一步地，所述短短芽孢杆菌种子液是由短短芽孢杆菌经菌种活化、一级种子液制备和二级种子液制备得到。

进一步地，所述菌种活化具体为将短短芽孢杆菌接种于营养琼脂培养基上进行培养。

进一步地，所述一级种子液制备具体为将经菌种活化后的菌种接种于含有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖的种子培养基中进行摇瓶培养，得到一级种子液。

进一步地，所述二级种子液制备具体为将所述一级种子液接种于含有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖的种子培养基中进行搅拌培养。

本发明还提供了一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将短短芽孢杆菌种子液按体积比为1～5％的接种量接入发酵培养基中进行发酵，直至所得发酵液中90％以上菌体形态为芽孢；