[发明专利]基于微流控和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统及其应用

说明书

本发明提供了基于微流控技术和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统及其应用，属于外泌体分离检测技术领域。超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统采用双抗体夹心法结合外泌体表面蛋白，所形成的超顺磁纳米微粒‑外泌体复合物在被磁化的磁性颗粒分离柱所吸附而稳定结合，利用微流控技术最大限度减少超顺磁纳米微粒‑外泌体复合物的动能，使得外泌体的分离捕获效率得到显著提升。本发明通过将微流控技术、磁分离技术和化学发光免疫分析相结合，实现外泌体的高效分离和快速检测。所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统在外泌体捕获中的应用。

技术领域

本发明属于外泌体分离检测技术领域，具体涉及基于微流控和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统及其应用。

背景技术

外泌体是细胞释放到胞外的大小为30nm～200nm的双层膜性囊泡，携带大量蛋白质、脂质和RNAs等物质，介导体内细胞间的信息传导，从而影响细胞的生理功能。外泌体膜表面除了共有标记物(如CD9、CD63、CD81等)外，亦表达多种特异性标记物(如GPC1、GPC3、PSMA、TMEM256、EpCAM等)，这些特异性外泌体高度反映了宿主细胞类型和状态。研究显示，分离检测特异性外泌体对疾病诊断、治疗监控与预后判断具有重要意义，尤其在恶性肿瘤诊断方面具有很高诊断特异性和诊断灵敏度。

目前对于体液中特异性外泌体的检测主要是先通过超速离心法进行外泌体的分离纯化，然后对外泌体特殊标记物进行定量检测，这种方式耗时长，不方便，不利于临床常规开展。

发明内容

有鉴于此，本发明为了提供一种快速高效的基于微流控技术和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒的外泌体分离检测系统及其应用，从而实现生物样品外泌体的准确、快速检测的目的，方便临床应用。

本发明提供基于微流控技术和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒的外泌体分离检测系统，包括生物素标记的外泌体表面蛋白抗体、亲和素包被的超顺磁纳米微粒、发光标记抗体、洗脱液、发光激发液、分离柱、磁分离装置、精密微量注射泵、进样器和化学发光检测仪；所述分离柱包括分离柱柱体、连接在所述分离柱柱体一端的进样管道和连接在所述分离柱柱体另一端的出样管道；所述分离柱柱体中填充有磁性颗粒材料；

所述发光标记抗体为化学发光标记物标记的外泌体表面蛋白抗体；

所述生物素标记的外泌体表面蛋白抗体或发光标记抗体中外泌体表面蛋白抗体对应的外泌体表面蛋白包括CD9、CD63、CD81、GPC1、GPC3、PSMA、TMEM256或EpCAM；

其中所述生物素标记的外泌体表面蛋白抗体或发光标记抗体中外泌体表面蛋白抗体不能同时选择对应同一种类蛋白的抗体。

优选的，所述分离柱柱体的内径为1.0～5.0mm；所述分离柱柱体的外径为1.5～5.5mm；所述分离柱柱体的垂直高度为1～8cm。

优选的，所述出样管道的内径为0.2～0.8mm；所述出样管道的外径为0.4～1.2mm；所述出样管道的长度为8～15cm。

优选的，所述进样管道的内径为0.2～0.8mm；所述进样管道的外径为0.4～1.2mm；所述进样管道的长度为8～15cm。

优选的，所述进样管道、出样管道或分离柱柱体的材料为聚四氟乙烯。

优选的，所述磁性颗粒材料为球形磁性颗粒；所述球形磁性颗粒的粒径为10～1000μm；所述磁性颗粒材料包括镍、铬、铁或铁氧化物磁性材料。

优选的，所述外泌体表面蛋白抗体-超顺磁纳米微粒偶联物中超顺磁纳米微粒的粒径为3～50nm。

本发明提供了所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统在外泌体分离中的应用。

优选的，所述外泌体分离的方法，包括以下步骤：