[发明专利]基于微流控和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统及其应用

权利要求书

1.基于微流控技术和化学发光免疫分析的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，包括标记生物素的外泌体表面蛋白抗体、亲和素包被的超顺磁纳米微粒、发光标记抗体、洗脱液、发光激发液、分离柱、磁分离装置、精密微量注射泵、进样器和化学发光检测仪；所述分离柱包括分离柱柱体、连接在所述分离柱柱体一端的进样管道和连接在所述分离柱柱体另一端的出样管道；所述分离柱柱体中填充有磁性颗粒材料；

所述发光标记抗体为化学发光标记物标记的外泌体表面蛋白抗体；

所述发光标记抗体或标记生物素的外泌体表面蛋白抗体中外泌体表面蛋白抗体对应的外泌体表面蛋白包括CD9、CD63、CD81、GPC1、GPC3、PSMA、TMEM256或EpCAM；

其中所述标记生物素的外泌体表面蛋白抗体或发光标记抗体中外泌体表面蛋白抗体不能同时选择对应同一种类蛋白的抗体。

2.根据权利要求1所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述分离柱柱体的内径为1.0～5.0mm；所述分离柱柱体的外径为1.5～5.5mm；所述分离柱柱体的垂直高度为1～8cm。

3.根据权利要求1所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述出样管道的内径为0.2～0.8mm；所述出样管道的外径为0.4～1.2mm；所述出样管道的长度为8～15cm。

4.根据权利要求1所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述进样管道的内径为0.2～0.8mm；所述进样管道的外径为0.4～1.2mm；所述进样管道的长度为8～15cm。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述进样管道、出样管道或分离柱柱体的材料为聚四氟乙烯。

6.根据权利要求1所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述磁性颗粒材料为球形磁性颗粒；所述球形磁性颗粒的粒径为10～1000μm；

所述磁性颗粒材料包括镍、铬、铁或铁氧化物磁性材料。

7.根据权利要求1所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统，其特征在于，所述亲和素包被的超顺磁纳米微粒的粒径为3～50nm。

8.权利要求1～7任意一项所述的超顺磁纳米微粒外泌体分离检测系统在外泌体分离中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述外泌体分离的方法，包括以下步骤：

(1)将标记生物素的外泌体表面蛋白抗体、亲和素包被的超顺磁纳米微粒和外泌体样品混合反应，得到第一反应液；

(2)将所述第一反应液和发光标记抗体混合，封闭，得到第二反应液；

(3)将所述分离柱预先置于磁分离装置上，将进样器吸取所述步骤(2)中的第二反应液后，与进样管道连接；再将进样器固定在精密微量注射泵上，设定微量注射泵的参数后进样；

(4)所述进样完成后，用进样器吸取磷酸盐缓冲液，在通过精密微量注射泵控制下对所述分离柱进行冲洗；

(5)所述洗涤完成后，将所述分离柱从磁分离装置上移开，静置5～10min，在精密微量注射泵控制下用洗脱液洗脱捕获的超顺磁纳米微粒-外泌体复合物；

(6)将所述捕获的超顺磁纳米微粒-外泌体复合物和发光激发液混合，采用化学发光检测仪检测，将检测结果带入相应的标准曲线中，得到分离的外泌体的浓度。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述微量注射泵的参数如下：通道数量优选为1～20个通道；进样速度为0.5～2ml/h，最大行程为140mm；行程分辨率为0.03125um；线速度调节分辨率为1～5μm/min；行程控制精度为误差≤±0.5％；额定线性推力为>90N。