[发明专利]白及高温内参基因Bs18S rRNA和BsUBI

说明书

本发明属于白及基因组技术领域，具体涉及两个在高温条件下稳定表达的高温内参基因Bs18S rRNA和BsUBI。所述Bs18S rRNA基因，含有1792bp；所述BsUBI基因，含有422bp。本申请中，基于正常生长温度和高温胁迫条件下的对比，对部分候选内参基因的表达稳定性进行了实时荧光定量PCR分析，综合分析结果表明：Bs18S rRNA和BsUBI这两个基因在正常生长温度和高温胁迫下的不同时间和不同组织中表达情况最为稳定，因此可为高温胁迫条件下基因表达稳定性和可靠性研究、以及耐高温白及种质资源筛选和培育奠定一定应用基础。

技术领域

本发明属于白及基因组技术领域，具体涉及两个在高温条件下稳定表达的高温内参基因Bs18S rRNA和BsUBI。

背景技术

白及（Bletilla striata （Thunb.） Reihb.f.），又白芨、良姜、紫兰、连及草、白根、地螺丝、羊角七等，属兰科白及属多年生草本植物，是中药材白及的基原植物，以块茎入药，具有补肺、消肿、止血、生肌等功效。主要分布于我国华南、西南海拔100~3200 m林下阴湿处或山坡草丛中。白及性喜温暖、阴凉和较阴湿的环境，高于36℃其生长便会受到明显影响。因此，耐热性资源和基因挖掘是白及育种工作的重要目标之一。

内参基因原则上是在某个条件下恒定表达的基因，主要作为检测目的基因在特定条件下的表达水平情况的参照物。很多研究表明，不同物种不同条件下，内参基因的表达水平是变化的，在任何条件下都能稳定表达的内参基因几乎不存在。因此不同条件下选择合适的内参基因是实时荧光定量PCR研究的关键之一。因此，在研究某个物种某种特定条件下目的基因的表达情况时，应先筛选在这种条件下能够稳定表达的内参基因。

而就白及基因研究而言，由于白及的不耐热特性，因此在进行耐热性资源筛选时，筛选确定高温条件下可稳定表达的内参基因，对于相关基因分析及遗传育种研究工作均具有十分重要的应用意义。

发明内容

本申请目的在于提供两个在正常生长温度及高温胁迫条件下在不同组织以及不同生长阶段均能稳定表达的内参基因Bs18S rRNA和BsUBI，从而为白及相关功能基因研究及耐高温白及资源筛选奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

白及高温内参基因Bs18S rRNA和BsUBI，这两个基因在白及正常生长及高温胁迫条件下表达均较为稳定一致，所述Bs18S rRNA基因，含有1792bp，碱基序列如SEQ ID NO.6所示；所述BsUBI基因，含有422bp，碱基序列如SEQ ID NO.7所示。

用于PCR扩增获得白及高温内参基因Bs18S rRNA和BsUBI的简并引物，具体如下：

Bs18S rRNA-F：5’- TGGTTGATCCTGCCAGTAGT-3’，

Bs18S rRNA-R：5’- GTTCACCTACGGAAACCTTG-3’ ，

BsUBI-F：5’- ATGCAGATCTTCGTGAARACCCT-3’ ，

BsUBI-R：5’- CAGTAGTGGCGRTCGAAGTGGT-3’。