[发明专利]基于APOA4蛋白胃癌检测试剂盒、及其使用方法

说明书

本发明公开了基于APOA4蛋白胃癌检测试剂盒，所述检测试剂盒的组成包括：溶液A：采用抗体稀释液将Human APOA4蛋白稀释成工作溶液，作为标准品；溶液B：采用生物素检测抗体稀释液将浓缩生物素检测抗体稀释成工作溶液，所述浓缩生物素检测抗体采用鼠抗人AMY1A单克隆抗体；溶液C：采用HPR共轭稀释剂将浓缩HRP结合物稀释成工作溶液；溶液D：采用抗体稀释液将兔抗人AMY1A多克隆抗体稀释成工作溶液；溶液E：Wash Buffer；溶液F：显色液；溶液G：终止液。本发明采用ELISA法检测将所述的基于APOA4蛋白胃癌检测试剂盒用于检测血清中APOA4蛋白表达水平，成本较低，操作方便，利于基层推广普及应用。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种基于APOA4蛋白胃癌检测试剂盒、及其使用方法。

背景技术

胃癌(Gastric Cancer)是世界上发病率最高的肿瘤之一，如何提高胃癌患者的早诊早治是目前国内研究的热点问题。因为早期胃癌没有明显的临床表现，胃癌的早期临床表现也常常与胃炎相混淆，所以大多数胃癌患者即使肿瘤发展至进展期或者晚期，也没有特异性临床症状出现，因而依靠临床表现诊断胃癌显然无法实现。虽然胃镜筛查已经成为中年以上人群的体检项目，但由于是侵入性检查方法，普通民众接受度不高，另检查设备成本较高在基层普及具有一定的困难。一些常规的检测指标诸如CEA、CA199和CA724等用于消化道肿瘤检测的肿瘤标志性蛋白质，也由于在普通人群中筛查的敏感性和特异性均不高的原因只能用于部分胃癌患者的术后复发与转移的监测。目前寻找特异性肿瘤标记物，尤其是在外周血中寻找对于胃癌有明确特异性的标志性蛋白质分子具有很高的临床价值。

APOA4基因编码载脂蛋白A-IV，该蛋白经水解、糖基化后生成酸性糖蛋白，主要存在于乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)中。在血脂运输和代谢，特别是在胆固醇逆转运过程中起重要作用。

国内外的众多研究表明，APOA4基因上的多态现象与血糖、血浆脂蛋白、胆固醇以及甘油三酯等的水平相关。APOA4基因的缺陷可直接导致血浆中的载脂蛋白A-IV水平的下降或活性的改变，其他一些脂蛋白和胆固醇的水平相应升高，从而大大提高罹患高脂蛋白血症和冠心病的风险。另外，也有研究发现APOA4基因和阿尔茨海默氏症也存在着一定的关系。

基因结构：APOA4全称Apolipoprotein A-IV(载脂蛋白A-IV)，位于第11号染色体11q23位置，与APOA1及APOC3基因连锁。该基因全长2,603bp,共有3个外显子和2个内含子。mRNA全长1,460nt，编码由396个氨基酸残基组成的蛋白。

生物学功能：载脂蛋白A-IV(apoA-IV)是一种酸性糖蛋白，分子量46kD。它是血浆脂蛋白家族中最常见的成员，具有多种调节脂蛋白代谢的功能。apoA-IV在人类和啮齿类动物肠道中广泛存在，主要由小肠和肝脏分泌。在哺乳动物中，apoA-IV主要是由小肠绒毛上皮细胞在吸收脂肪时合成，然后结合在乳糜微粒表面，随之进入循环系统。因此apoA-IV合成和分泌受乳糜微粒合成、瘦素、高脂饮食等多种因素的影响。

虽然有大量研究揭示了apoA-IV众多生理功能，但其确切作用机制尚不清楚，目前公认的生理生化功能有：

1)激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)，催化游离胆固醇转变为胆固醇酯，参与HDL的成熟过程。Steinmetz等人的体外实验证明了apoA-IV同apoA-I类似都能激活LCAT，其激活效率与底物有关；

2)辅助apoC-Ⅱ激活脂蛋白脂酶(LPL)，LPL能水解血浆CM和VLDL中的甘油三酯，因此也参与外源性脂肪的吸收。Goldbery等人的实验证明只有在apoA-Ⅱ存在的条件下，apoA-IV能提高LPL活性，而apoA-I、apoE、CETP则无此作用；