[发明专利]生产抗体片段的方法

权利要求书

1.一种生产目标抗原抗体片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)至少两次将包含所述目标抗原的免疫混合物施予来自斑竹属(Chiloscyllium)的竹鲨；

b)从所述竹鲨采集血液样本；

c)从所述血液样本中提取RNA；

d)对所述RNA进行逆转录以获得cDNA，并且将所述cDNA扩增以获得扩增的cDNA的混合物，然后将其纯化，其中，所述cDNA通过使用至少一个引子组而扩增，所述引子组选自由以下组成的组中：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的组，以及SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的组；

e)将在所述步骤d)中获得的所述cDNA插入到载体以生成重组质粒；

f)利用酒精和盐通过沉淀纯化所述重组质粒，并将所述重组质粒引入细菌细胞以形成重组细胞；和

g)培养所述重组细胞并且从所述培养的重组细胞提取所述抗体片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述竹鲨是点纹斑竹鲨(Chiloscylliumpunctatum)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫混合物包括所述目标抗原和弗氏佐剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤a)中，每个月一次将所述免疫混合物施予所述竹鲨，持续至少三个月。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体片段是单域抗体。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组质粒包括紧密素域。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤e)中，所述cDNA和所述载体的摩尔比是9:1。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细菌细胞是大肠杆菌细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标抗原是荧光分子或有机染料。

10.一种从来自斑竹属(Chiloscyllium)的竹鲨生产目标抗原的抗体片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)至少两次将包含所述目标抗原的免疫混合物施予所述竹鲨，其中，所述目标抗原是荧光分子或有机染料；

b)从所述竹鲨采集血液样本；

c)从所述血液样本提取RNA；以及

d)对所述RNA进行逆转录以获得cDNA，并且扩增所述cDNA以获得扩增cDNA的混合物，然后将其纯化，其中，所述cDNA通过使用至少一个引子组而扩增，所述引子组包括选自由以下组成的组中：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的组，以及SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的组。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述竹鲨是点纹斑竹鲨(Chiloscylliumpunctatum)。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，每个月一次将所述免疫混合物施予所述竹鲨，持续至少三个月。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述免疫混合物包括所述目标抗原和弗氏佐剂。

14.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述目标抗原是绿色荧光蛋白。

15.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，还包括将所述cDNA插入到载体以形成重组质粒的步骤，其中所述重组质粒包括紧密素域；并且将所述重组质粒引入大肠杆菌细胞以形成重组细胞。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，还包括培养所述重组细胞并且提取所述抗体片段的步骤。