[发明专利]鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法及其产品

说明书

本发明公开了鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法及其产品。所述制备方法包括：(1)将鹅星状病毒液与佐剂配制后作为免疫原免疫健康产蛋鹅制备得到高免蛋，收集高免蛋；(2)将高免蛋的蛋壳消毒后，收集卵黄；采用酸水‑卡拉胶法从卵黄中提取卵黄抗体。本发明制备方法所提取的鹅星状病毒卵黄抗体的回收率大于93％，纯度大于95％，在回收率、提取量、纯度等指标上均显著优于采用现有方法制备得到的鹅星状病毒卵黄抗体。采用本发明制备的鹅星状病毒卵黄抗体，只需要0.5ml的预防剂量能起到较好的保护效果，对强毒的攻毒保护率达到100％。本发明可针对性的防治鹅星状病毒的感染与爆发，同时简化了生产工艺，可规模化生产并应用于临床。

技术领域

本发明涉及鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法，本发明进一步涉及由该制备方法得到的鹅星状病毒卵黄抗体及其应用，属于鹅星状病毒卵黄抗体的制备和应用领域。

背景技术

小鹅瘟(Gosling plague)，又称鹅细小病毒感染，是雏鹅的一种急性败血性传染病，以精神萎顿、食欲废绝、严重下痢，有时出现神经症状，死亡率高为临诊特点，可经消化道和呼吸道感染，并可经卵垂直传播。本病主要侵害4～20日龄的易感雏鹅，具有传播快、发病率高和致死率高的特点。目前本病呈世界性分布，常引起雏鹅大批死亡，对养鹅业的发展影响极大。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG类抗体，因此称其为卵黄免疫球蛋白IgG(yolk antibody)，简称为IgY。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体，IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG，单个卵黄(约15ml)中卵黄抗体含量可达200mg左右。再加之从卵黄中提取抗体较从动物血清中提取抗体简便，因此卵黄抗体具有明显的技术优势。

现有的鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法存在回收率低、纯度不高以及免疫保护效果不够理想等缺陷，有待改进。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法，该制备方法具有回收率高、纯度高，所获得的鹅星状病毒卵黄抗体免疫保护效力高等优点；

本发明的目的之二是将所制备的鹅星状病毒卵黄抗体应用于防治鹅星状病毒。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供了一种鹅星状病毒卵黄抗体的制备方法，包括：

(1)将鹅星状病毒液与佐剂配制后作为免疫原免疫健康产蛋鹅制备得到高免蛋，收集高免蛋；(2)将高免蛋的蛋壳消毒后，收集卵黄；采用酸水-卡拉胶法从卵黄中提取卵黄抗体；

其中，步骤(1)中将鹅星状病毒液与油乳佐剂混合配制得到油乳佐剂免疫原；为了实现更好的免疫效果，优选的，将鹅星状病毒液与油乳佐剂按照1:1.5(V/V)的体积比例混合配制得到油乳佐剂免疫原。

本发明通过优化实验发现，采用下述的免疫程序能够有效的提高免疫效果：

(1)基础免疫：将鹅星状病毒油乳佐剂免疫原皮下注射健康产蛋鹅星状病毒，每只1.0ml；

(2)加强免疫：基础免疫21日后，皮下注射相同的油乳佐剂免疫原，每只1.5ml；

(3)强化免疫：加强免疫21日后，皮下注射相同的油乳佐剂免疫原，每只2.0ml；

(4)维持免疫：在强化免疫接种后根据抗体效价，每隔2～3个月再加强接种1次，每只2.0ml。

步骤(1)中所述高免蛋的收集方法包括：产蛋鹅星状病毒强化免疫接种结束后10日，每隔5日抽样测定高免鹅星状病毒蛋黄中抗体效价，当中和指数≥500时，收集高免蛋。