[发明专利]一种同时提取生物样品中极性和弱极性代谢物的方法

权利要求书

1.一种同时提取生物样品中极性和弱极性代谢物的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

(1)向生物样品加入酸性蛋白变性剂，定量移取并加入内标溶液，涡旋混匀，得到体系I；

(2)将步骤(1)中体系I进行极性和弱极性代谢物的选择性富集及杂质去除，得到体系II；

(3)将步骤(2)中的体系II进行有机溶剂萃取，分别收集富含极性代谢物的上层和富含弱极性代谢物的下层。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述富含极性代谢物的上层进行毛细管液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用分析，将富含弱极性代谢物的下层进行超高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用分析。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述生物样品的体积为50μL～1200μL，酸性蛋白变性剂溶液用量为生物样品用量的0.1～1倍，优选地为0.1～0.4倍体积；

优选地，所述酸性蛋白变性剂选自磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液、三氯乙酸水溶液中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述极性和弱极性代谢物选择性富集及杂质去除的步骤包括盐析辅助液液萃取；

优选地，所述极性和弱极性代谢物的选择性富集及杂质去除的步骤包括：将盐析辅助液液萃取试剂加入到步骤(1)中所述体系I中，振荡，涡旋，离心，取上层上清液；

优选地，所述盐析辅助液液萃取试剂包括亲水性有机溶剂和盐溶液，其中，优选所述亲水有机溶剂与生物样品的体积比为20:1～1:1，盐溶液和亲水性有机溶剂的体积比为1:1～1:4；

进一步优选地，所述亲水性有机溶剂选自甲醇、乙腈和异丙醇中的至少一种；优选地，所述盐溶液选自磷酸氢二钾溶液、磷酸钾溶液和氯化镁溶液中的至少一种；优选地，所述盐溶液的溶剂为水，盐溶液的浓度为0.7M～4M。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在将盐析辅助液液萃取试剂加入到体系I的步骤中，先加入所述盐溶液，再加入所述亲水有机溶剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述极性和弱极性代谢物收集包括：将步骤(2)中所述体系II中的上清液干燥，加入液相色谱流动相A复溶，加入有机溶剂，离心，上层为极性代谢物富集组分，下层为弱极性代谢物富集组分；

优选地，所述液相色谱流动相A为体积分数为5％～30％的乙腈，加入量为1/20～1/5倍生物样品体积；

优选地，所述有机溶剂选自二氯甲烷和三氯甲烷中的至少一种；

优选地，所述液相色谱流动相A与有机溶剂的体积比为1:1～5:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中收集得到的弱极性代谢物富集组分干燥后，用液相色谱流动相B复溶；

优选地，所述液相色谱流动相B为体积分数为50％～70％的乙腈，加入量为20～100μl。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中去除的杂质包括高丰度蛋白、无机盐和固体杂质。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样品包括血浆、血清、尿液、脑脊液和生物组织匀浆液中的至少一种。

10.根据权利要求4或6所述的方法，其特征在于，所述离心的步骤以3000rpm～15000rpm，离心20分钟～60分钟执行。