[发明专利]一种游离DNA提取试剂盒

权利要求书

1.一种游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括：

脂质体磁珠溶液，该脂质体磁珠溶液包含用于吸附血浆内游离DNA使DNA被分离的脂质体磁珠，该脂质体磁珠的制备方法包括以下步骤：

步骤1，将含有X mg裸磁球的裸磁球溶液与二氯甲烷溶液混合得到第一液体，将含有0.02X mg～0.15X mg胆固醇的胆固醇/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg二油酰基卵磷脂的二油酰基卵磷脂/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg磷脂聚乙二醇马来酰亚胺的磷脂聚乙二醇马来酰亚胺/二氯甲烷溶液、含有0.05X mg～0.2X mg(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺/二氯甲烷溶液进行混合，得到第二液体，按所述第一液体:所述第二液体＝1:1～1:5的体积比例，将所述第一液体加入到所述第二液体中并超声混匀后得到第三液体；

步骤2，分别将0.05X mg～0.1X mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、0.05X mg～0.1X mg的N-羟基丁二酰亚胺溶液加入到所述第三液体中并超声混匀，得到初乳；

步骤3，将0.05X mg～0.1X mg的聚乙烯吡咯烷酮溶液加入所述初乳中并混匀，形成复乳；

步骤4，去除所述复乳中的二氯甲烷，得到第四液体；以及

步骤5，将所述第四液体在透析袋中透析第一时间，即获得含有所述脂质体磁珠的悬浮液，

其中，在所述脂质体磁珠溶液中，

所述脂质体磁珠浓度为10～50mg/ml。

2.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：

其中，所述脂质体磁珠溶液的pH为6.5～6.8，

所述脂质体磁珠溶液还含有3.8M盐酸胍、1M NaCl、1％Triton x-100、0.5％SDS、10mMTris以及1mM EDTA。

3.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：

其中，所述透析袋截留分子量为8000kD～12000kD，

所述第一时间为24h～72h。

4.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，其特征在于：

其中，在所述步骤4中，所述复乳中的二氯甲烷的去除采用旋转蒸发仪旋蒸进行。

5.根据权利要求1所述的游离DNA提取试剂盒，还包括：

洗涤液I、洗涤液II、洗脱液以及磁分离架，

所述洗涤液I为含有1M NaCl、0.5％SDS以及60％乙醇的水溶液，用于洗涤所述游离DNA样本，洗去多余物质；

所述洗涤液II为70％乙醇水溶液，用于对所述游离DNA样本进行二次洗涤，再次洗去多余物质；

所述洗脱液为pH是7.0～7.25的10mM Tris-HCl溶液，用于将所述游离DNA样本从所述脂质体磁珠表面洗脱下，进入到所述洗脱液中；

所述磁分离架，包含多重孔径的分离架和可抽取式的内嵌高能量的钕铁硼永磁体磁铁，该磁分离架用于对所述脂质体磁珠进行高效分离，从而达到快速分离纯化所述游离DNA。

6.一种利用权利要求5所述的游离DNA提取试剂盒在科学实验中进行提取游离DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A，在5ml离心管中加入5ml样本血浆，在离心机中以1500rpm的速度离心10min；

步骤B，取离心管的中上层液1ml～2ml于5ml EP管中并加入15ul所述洗涤液I，涡旋混匀30sec，置于水浴锅中60℃孵育30min，孵育过程中每10min振荡混匀一次；

步骤C，孵育结束后，冰上静置5min；

步骤D，加入30ul所述脂质体磁珠溶液，振荡混匀30sec，置于3D混匀仪上混匀30min，以便游离DNA与所述脂质体磁珠充分结合；

步骤E，将完成步骤D的EP管溶液放在所述磁分离架上静置至溶液变澄清并去上清液；

步骤F，加入1ml的所述洗涤液II，涡旋混匀1min，重悬所述脂质体磁珠，室温孵育10min，孵育结束后，将EP管溶液放在所述磁分离架上静置至溶液变澄清并去上清液；

步骤G，向EP管中加入1ml的洗脱液，用移液枪将磁球吹打均匀，再涡旋混匀5min，室温孵育30min，将EP管置于所述磁分离架上静置至溶液变澄清，磁分离后回收上清液，从而得到所述游离DNA。