[发明专利]单元DNA组合物的制备方法及DNA连结体的制作方法

权利要求书

1.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA，准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序。

2.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，工序(3)为制备混合液的工序，所述混合液包含通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离而切割得到的所述多个单元DNA；

所述方法进一步包括下述工序：

(4)在工序(3)后从所述混合液中除去所述附加序列而取得所述单元DNA的工序。

3.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，

所述多个单元DNA包含用于附加序列的除去的限制性内切酶的种类相同的单元DNA组，

工序(3)为将包含所述单元DNA组的混合液供于限制性内切酶处理的工序。

4.如权利要求1所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，所述连结有附加序列的单元DNA具有环状结构，所述附加序列为具有复制起点的质粒DNA序列。

5.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA，准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序，

其中，所述单元DNA各自的碱基长度和与各单元DNA连结的附加序列的碱基长度的合计总长度的分布的标准偏差为相对于所述总长度平均值而言±20％以内。

6.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA，准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序，

其中，与所述各单元DNA连结的附加序列的平均碱基长度为所述单元DNA的平均碱基长度的2倍以上。

7.如权利要求1至6中任一项所述的单元DNA组合物的制备方法，其中，所述单元DNA各自的长度为1600bp以下。

8.单元DNA组合物的制备方法，所述方法包括下述工序：

(1)针对连结有附加序列的多个单元DNA，准备分别含有其中的每一种所述单元DNA的溶液的工序；

(2)在准备所述各溶液后，在所述单元DNA连结有附加序列的状态下，测定所述各溶液中的单元DNA的浓度，基于其结果分取所述各溶液，使各溶液中的单元DNA的摩尔数接近于彼此相同的工序；和

(3)在工序(2)后通过限制性内切酶处理对所述附加序列和所述单元DNA进行切割分离的工序，

其中，所述单元DNA用于制作含有由该单元DNA构成的组装DNA的DNA连结体，

所述方法中，准备含有所述单元DNA的溶液的工序包括以下工序：

以所述组装DNA中下述位置的序列附近的非回文序列为界，设计在端部具有非回文序列的所述单元DNA，所述位置是以用所述组装DNA的序列的碱基长度除以所述单元DNA的种类数时各段碱基长度相等的方式将所述组装DNA等分时的位置。

9.一种DNA连结体的制作方法，所述DNA连结体是用于微生物细胞转化的DNA连结体，所述用于微生物细胞转化的DNA连结体含有大于1个的下述组装DNA单元，所述组装DNA单元含有载体DNA和组装DNA，所述载体DNA包含在宿主微生物中有效的复制起点，所述方法包括下述工序：

利用权利要求1至6和8中的任一项所述的方法制备单元DNA组合物的工序；

准备所述载体DNA的工序；

使用限制性内切酶、从制备得到的所述溶液中连结有附加序列的单元DNA中除去各自的附加序列的工序；和

在所述除去工序后，将所述载体DNA及所述各单元DNA彼此连结的工序，

其中，所述载体DNA及所述各单元DNA具有能够以彼此保持顺序的状态重复连结的结构，

所述组装DNA包含所述各单元DNA彼此连结而成的DNA。