[发明专利]一种茶碱人工抗原的合成方法及其应用

说明书

本发明涉及一种茶碱人工抗原，其特征在于，其结构通式如下：本发明还涉及一种茶碱人工抗原的制备方法和其应用，在茶碱7号位的N上衍生出羟基，用琥珀酸酐衍生出羧基，通过羧基与蛋白质偶联得到茶碱人工抗原。本发明的制备工艺方法简单，过程使用材料和催化剂均为普通产品，反应条件容易实现，反应过程不使用氯仿，适于工业生产。本发明采用的连接臂为链状，保留了茶碱的特征结构，同时尽可能降低免疫动物的免疫系统对连接臂的识别，易于制备特异性抗体，适合于胶体金茶碱检测试纸条的应用。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域；具体涉及利用化学合成方法从去甲基茶碱 开始合成茶碱及其衍生物，再与大分子蛋白偶联应用于胶体金检测卡。

背景技术

下面的背景技术用于帮助读者理解本发明，而不能被认为是现有技术。

茶碱(Theophylline)可使平滑肌张力降低，呼吸道扩张；可促进内源性 肾上腺素、去甲肾上腺素的释放，气道平滑肌松弛；抑制钙离子由平滑肌内质 网释放，降低细胞内钙离子浓度而产生呼吸道扩张作用。茶碱对平滑肌的松弛 作用较强，但不及β受体激动剂。

2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初 步整理参考，茶碱在3类致癌物清单中。

作为一些茶碱的衍生物，在部分国家和地区也被列入了管制品目录。

因此进行茶碱检测的相关试剂及其产品的开发就成为需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种茶碱人工半抗原，该茶碱人工半抗原最大程度地 保留了茶碱的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为 抗原决定簇；进一步制备获得的茶碱人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、 特异性强的抗茶碱抗体。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种茶碱人工抗原，其特征在于，其分子结构式如下所示：

本发明提供的茶碱人工半抗原，在茶碱的N位上引入连接臂，在该修饰位点 上引入连接臂能最大程度地保留茶碱的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生 偶联的活性基团，可作为抗原决定簇。

本发明所采用的连接臂为链状，可以尽可能的降低免疫动物是对连接臂识别 度，这样免疫得到的抗体对茶碱的特异性更强。其反应式如下其反应式如下： 反应式一：

反应式二：

本发明选用牛血清蛋白(BSA)作为大分子载体，与牛丙种球蛋白(BGG)相比 具有以下优点：

牛血清蛋白(BSA)能够结合更多的茶碱人工半抗原，免疫原性较好；

从实验看，牛血清蛋白(BSA)与茶碱人工半抗原的结合更稳定，牛丙种球 蛋白(BGG)与茶碱人工半抗原结合后，茶碱人工半抗原容易在后续处理中脱离， 从而使最终的人工抗原在长期保存中容易产生沉淀，稳定性差；

用牛血清蛋白(BSA)与茶碱人工半抗原结合后形成的茶碱人工抗原，经动 物免疫得到的抗茶碱体的特异性更好。

本发明还提供了所述的茶碱人工抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取一定量的茶碱加入到50ml单口瓶中，并加入36％的甲醛溶液和三乙 胺，室温充分搅拌一个小时，再加入四氢呋喃，室温搅拌5分钟，再静置两天， 有白色固体析出，过滤并干燥得白色固体产物1，其中，茶碱、36％甲醛溶液、 三乙胺和四氢呋喃的摩尔比为1:5.5-6.6:1.02:2.6；