[发明专利]一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法。本发明提供的保护液包括1‑5份的肝素钙、20‑40份的低分子右旋糖苷、1‑2份的罂粟碱、5‑10份的海藻糖、800‑1000份的水和4‑6份的中药提取物。本发明提供的宫内膜干细胞保护液不含血清，价格低廉，保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较高，随着时间的延长，减缓宫内膜干细胞的复苏率的降低速率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法。

背景技术

宫内膜干细胞具有高度增殖活性及自我再生能力，在细胞治疗和再生医学中有着重要的临床医学价值，目前已经可以在体外培养扩增宫内膜干细胞，用于科学研究、药物筛选测试、临床应用等，为了方便的取用体外培养扩增的宫内膜干细胞，一般需要对培养出的宫内膜干细胞进行冻存和复苏，目前，一般的宫内膜干细胞冻存时使用的冻存液分为含血清型和无血清型两类，含血清型冻存液成分复杂、价格昂贵且质量难以控制，因而无血清型冻存液的应用越来越多，无血清型冻存液主要含有70％的无血清培养基、20％牛血清白蛋白和10％二甲基亚砜，放置于无血清冻存液中保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率随着时间延长而大幅度降低，严重影响后续的使用。

发明内容

为了解决现有技术中宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较低等问题，本发明提供了一种宫内膜干细胞保护液，该保护液不含血清，价格低廉，保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较高，随着时间的延长，减缓宫内膜干细胞的复苏率的降低速率。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供了一种宫内膜干细胞保护液，该保护液包括如下重量份的各成分：

1-5份的肝素钙、20-40份的低分子右旋糖苷、1-2份的罂粟碱、5-10份的海藻糖、800-1000份的水和4-6份的中药提取物；

所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：

进一步地，中药提取物由如下重量份的成分制备而成：

本发明通过在保护液中加入肝素钙、低分子右旋糖苷、罂粟碱、海藻糖、水和中药提取物，为宫内膜干细胞提供充足的养分，减慢其新陈代谢速度，提高宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率。

进一步地，中药提取物的提取方法包括如下步骤：

1)取配方量的青叶胆洗净、粉碎，放置于50-70℃温水中减压浸提两次，每次浸提1-2h，青叶胆与50-70℃温水的固液比为1:10-12，浸提真空度为0.7-0.9Mpa，合并各次浸提液，得青叶胆浸提液；

2)取配方量的香附、蔓荆子和薤白放置于浓度为40-60％的乙醇溶液中超声30-40min，香附、蔓荆子和薤白的总重量与40-60％的乙醇溶液的固液比为1:40-60，超声频率为40-60KHz，得超声提取液；

3)将步骤1)获得的青叶胆浸提液与步骤2)获得的超声提取液合并，混合均匀，浓缩干燥至粉末，即得中药提取物。

其中，固液比是指某物质的重量g与液体的体积mL的比。

本发明通过以上方法制备中药提取物，通过各中药中不同的有效成分的配伍，与肝素钙、低分子右旋糖苷、罂粟碱和海藻糖共同作用，协同增效，进一步地提高宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率。

进一步地，保护液还包括重量份数为4-10份的维生素B6、2-4份的氯化镁和10-20份的N-乙酰半胱氨酸。

本发明通过在保护液中加入维生素B6、氯化镁、和N-乙酰半胱氨酸的混合物，能够很好地保持冻存复苏后的宫内膜干细胞的特性。