[发明专利]一种抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明提出了一种抗仔猪腹泻产毒大肠杆菌卵黄抗体的制备方法，属于抗体制备技术领域。本发明中抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体制备方法，通过采用已有的仔猪产毒大肠杆菌基因工程灭活疫苗及采用仔猪大肠杆菌性腹泻发病猪肠道分离物肠毒素及黏附性菌毛蛋白对SPF蛋鸡进行肌肉免疫，免疫过程中喂食专利屎肠球菌Anp01(Enterococcus faecium Anp01)CCTCC M 209019及中药组合物粉碎饲喂，作为免疫增强剂，收集2～6周的免疫传染性肠炎的鸡蛋，提取卵黄水提液，对卵黄水提液采用冻融法纯化获得卵黄抗体IgY。此抗体对仔猪产毒大肠杆菌引起腹泻的紧急治疗具有实用价值，对降低养猪业的经济损失，促进新型兽用生物药物开发具有重要意义。

技术领域

本发明属于抗体制备技术领域，涉及一种抗仔猪产毒大肠杆菌抗体，特别是指一种抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体的制备方法。

背景技术

仔猪腹泻是困扰规模化养猪生产的主要难题之一，给养猪业带来了巨大的经济损失。致病性大肠杆菌是造成新生仔猪和断奶仔猪腹泻的最重要的病原，其中产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicescherichiacoil，etec)是最主要的致病菌，治疗采用抗菌药物，易使仔猪消化道正常菌群受到破坏或者产生耐药性菌株，治疗效果不佳。本申请的这种用于治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的卵黄抗体制剂的制备方法，解决了现有技术中没有很好的药物治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的技术问题。

发明内容

为了克服以上缺陷，本发明提出了一种抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体的制备方法。本申请采用已有的仔猪大肠杆菌病基因工程活疫苗及仔猪大肠杆菌性腹泻发病猪肠道分离物产肠毒素大肠杆菌、肠毒素及黏附性菌毛蛋白对SPF蛋鸡进行免疫，在免疫过程中通过喂食屎肠球菌Anp01(Enterococcus faecium Anp01)CCTCC M 209019及中药组合物，通过收集2～6周的免疫SPF鸡的鸡蛋，提取卵黄水提液，对卵黄水提液采用冻融法纯化获得卵黄抗体IgY。此抗体对仔猪大肠杆菌性引起的腹泻的紧急治疗具有实用价值，本申请解决了现有技术中没有很好的药物治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的技术问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体的制备方法，依次包括如下步骤：

1)采用仔猪大肠杆菌K88、K99双价基因工程活疫苗免疫SPF蛋鸡；

2)采用仔猪大肠杆菌性腹泻发病猪肠道分离物，产肠毒素大肠杆菌、肠毒素及黏附性菌毛蛋白混合免疫原对SPF蛋鸡进行免疫；

3)在步骤2)中的SPF蛋鸡免疫过程中喂食屎肠球菌Anp01(Enterococcus faeciumAnp01)CCTCC M 209019及中药组合物，然后收集被免疫的鸡所产鸡蛋，从其蛋黄中提纯抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体IgY。

优选的，步骤1)中，所述SPF蛋鸡为20～30周龄。

优选的，步骤2)中，对SPF产蛋鸡进行免疫的步骤为：初次免疫前5日注射仔猪大肠杆菌病K88、K99双价基因工程活疫苗及混合免疫原进行免疫刺激，首免时注射1ml；2周后进行第二次免疫，分别注射仔猪大肠杆菌病K88、K99双价基因工程活疫苗及混合免疫原1ml；再隔2周进行第三次免疫，注射仔猪大肠杆菌病K88、K99双价基因工程活疫苗及混合免疫原2ml；再隔4周后进行第四次免疫，所述首免、第二次免疫、第三次免疫和第四次免疫均采用肌肉分点免疫。

优选的，步骤3)中，收集鸡蛋时间为步骤2)中首免后6～14周。

优选的，步骤3)中，提纯抗仔猪产毒大肠杆菌卵黄抗体采用聚乙二醇(PEG-6000)沉淀法，具体步骤为：依次分别用3.5％PEG-6000、8.5％PEG-6000、12％PEG-6000对卵黄抗体沉淀3次，最后用预冷的50％乙醇进一步沉淀，得到卵黄抗体提纯物。