[发明专利]tRNA相关肺腺癌预后模型及其应用

权利要求书

1.tRNA相关肺腺癌预后模型及其应用，包括提供了检测组织中tRNA表达水平在肺腺癌预后判断中的应用，其特征在于：它由以下步骤完成：

步骤一：肺腺癌及正常肺组织tRNA定量；

步骤二：tRNA与肺腺癌预后相关性；

步骤三：tRNA相关预后评分模型建立。

2.根据权利要求1所述的tRNA相关肺腺癌预后模型及其应用，其特征在于：所述肺腺癌及正常肺组织tRNA定量的步骤包括：

步骤一：确定研究对象；所使用的50对肺腺癌组织及癌旁正常肺组织组织样本来自胸外科进行手术的患者，患者诊断以最终石蜡切片诊断为准，所纳入的样本均为肺腺癌，患者的基本信息及预后信息完备；

步骤二：组织RNA提取步骤同常规；

步骤三：RNA的去甲基化；步骤为：

一、选择质量合格的样品进行去甲基化处理；

二、配置试剂；

三、需要满足去甲基化条件：37℃恒温水浴100min；终止甲基化条件：加入160μLNuclease-free水以及40μL Stop buffer(5×)，充分混匀；

步骤四：RNA沉淀；使用常规RNA沉淀方法，最后使用11μL Nuclease-free水，于56℃水浴锅中放置10min，使RNA充分溶于水；

步骤五：RNA反转录成cDNA；步骤为：

一、配制退火混合物；

二、置于PCR仪，其反应条件为：65℃，5min，迅速置于冰上，冷却1min以上；

三、配成mix；

四、将第二与第三的溶液充分混匀，25℃孵育8min，然后50℃孵育50min；

五、85摄氏度孵育5min终止反应。

步骤六：tRNA定量检测；步骤为：

一、选择质量合格的样本进行PCR array的检测；

二、1:40稀释cDNA，充分混匀，

三、进行qPCR检测。

步骤七：数据处理；不同芯片之间所获得的数据需要进行第一步标准化处理，设定标化系数，qPCR数据处理过程如下：

ΔΔCt＝ΔCt(样本)-ΔCt(内参)

倍数差异＝2-ΔΔCt(肿瘤)/2-ΔΔCt(正常)

比较两组之间的差异选择用双侧t检验，当p值<0.05时，认为有统计学差异。

3.根据权利要求1所述的tRNA相关肺腺癌预后模型及其应用，其特征在于：所述tRNA与肺腺癌预后相关性包含收集所有患者的临床病理特征以及患者的无复发生存期和总生存期，并且将tRNA在肿瘤与对应癌旁组织中的相对表达量与患者的预后进行分析，通过Kaplan-Meier方法绘制RFS和CSS的存活曲线，对于每个存活曲线，进行对数秩检验，使用Cox PH回归模型进行单变量和多变量分析，统计结果以95％置信区间(CI)表示，所有测试都是双尾的，显着性设定为p<0.05。R版本3.2.5软件。

4.根据权利要求1所述的tRNA相关肺腺癌预后模型及其应用，其特征在于：所述tRNA相关预后评分模型建立包含单因素和多因素Cox PH回归显示基于tRNA的预后评分是肺腺癌患者CSS的独立预测因子。而性别、肿瘤分化和血管侵犯等临床病理因素也是独立的预测因素，为了确定tRNA为基础的预后评分在生存预测中的重要性，我们建立了两个多变量模型，一个模型包含预后评分和重要临床病理变量(组合模型)，另一个仅包含重要的临床病理变量(单一模型)。