[发明专利]一种生物碱的提取方法

说明书

本发明公开了一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；2)先后采用95‑100％乙醇、75‑80％乙醇回流浸提；3)酸化：减压浓缩，采用3‑8％的稀盐酸分散，离心，取上清液；4)除脂：向上清液中加入石油醚，分液取水相；5)加入浓氨碱化、减压浓缩，冻干；6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5‑2组成的混合液作为共溶剂溶解冻干样品；7)以石油醚、甲醇和氨水由5:2‑3:0.5的体积比组成的展开剂，点样、层析、显色；8)收集：切下硅胶，复溶，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。该提取方法可选择性同步提取水溶性生物碱和油溶性生物碱，减少了溶剂的使用、提高了提取效率。

技术领域

本发明涉及一种天然物质的提取和分离方法，尤其涉及一种生物碱的提取方法。

背景技术

生物碱存在于自然界(主要为植物，但有的也存在于动物)中的一类含氮的碱性有机化合物。大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。

生物碱目前通常采用乙醇回流法提取后再采用大孔树脂分离。其中，提取部分的步骤包括：粉碎、乙醇浸提、浓缩、酸化、除脂、碱化、氯仿及正丁醇饱和水溶液分别萃取、浓缩和冻干。冻干后再采用大孔树脂法分离得到纯的生物碱，处理步骤包括：树脂筛选、静态吸附、静态解吸、动态洗脱和结构鉴定。

但上述乙醇回流法和大孔树脂提纯结合的方法，提取耗时长，效率低、工艺繁琐，提取效果不佳。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速、高效的生物碱的提取方法。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：

1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；

2)浸提：采用95％乙醇或无水乙醇回流浸提；再采用75-80％的乙醇回流浸提，离心，收集上清液；

3)酸化：于50-65℃减压浓缩，采用3-8％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；

4)除脂：向上清液中加入1/4-1/2体积的石油醚，分液，取水相；

5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，70-80℃浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；

6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5-2组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5-10mg/mL的上样液；

7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:2-3:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；

8)收集：于指定Rf值位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。

进一步地，步骤1)中，粉碎过80目筛。

进一步地，步骤2)中，95％乙醇或无水乙醇浸提2-3次，每次浸提料液比为1:8-10，每次浸提时间为2-3h。

进一步地，步骤2)中，于4000-5000rpm离心15-20min。

进一步地，步骤3)中，于4000-5000rpm离心15-20min。

进一步地，步骤4)中，向上清液中加入1/3体积的石油醚。

进一步地，步骤6)中，共溶剂中氯仿与正丁醇体积比为1:1。

进一步地，步骤6)中，展开剂中，石油醚、甲醇和氨水的体积比为5:2:0.5。

进一步地，步骤8)中，收集Rf为0.4-0.5、0.8-0.9的组分。