[发明专利]一种细胞水平蛋白高通量检测方法

权利要求书

1.一种细胞水平蛋白高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)对外周血中的细胞进行富集，从而得到富集的细胞；

(b)将步骤(a)中富集的细胞、偶联有寡核苷酸的待检蛋白抗体、细胞鉴定标志物进行孵育；

(c)将步骤(b)中孵育后的细胞加载到微孔芯片上，从而使得所述微孔芯片上每个孔中有不多于一个细胞；

(d)对所述细胞进行分选，获得带有细胞鉴定标志物的目的细胞；

(e)对抗体上偶联的寡核苷酸进行扩增，从而得到扩增产物；

(f)对步骤(e)的扩增产物进行测序；

(g)对测序结果进行分析，从而获得单细胞水平蛋白高通量的测序结果。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞选自下组：血液中循环肿瘤细胞、其他液体样本如胸腔积液、脑脊液中的肿瘤细胞、血液与体液样本中的其他与疾病相关的细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述寡核苷酸为barcode序列。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述barcode序列为不同的序列。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞鉴定标志物包括循环肿瘤细胞鉴定标志物，包括能够鉴定循环肿瘤细胞的荧光标记抗体或分子。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞鉴定标志物选自下组：荧光素APC标记的CD45抗体(anti-CD45-APC)、荧光素PE标记的EpCAM抗体(anti-EpCAM-PE)、荧光葡萄糖类似物2-NBDG。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述寡核苷酸链中可变区为N个随意碱基，N为4-100，较佳地为5-60，更佳地，6-20。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(f)中建库引物为人工合成单链核苷酸，包含P5接头(illumina)、P7接头(illumina)、测序引物、N个碱基单细胞标签，其中N个随意碱基，N为4-100，较佳地为5-60，更佳地，6-20。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述单细胞标签与P5接头合成在同一条链上。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述单细胞标签与P7接头合成在同一条链上。