[发明专利]怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法

权利要求书

1.一种怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)外植体选择及预处理：选择健壮的无病虫害玉石籽石榴的新生腋芽、嫩茎段及新生叶片，作为组织培养的外植体，用流水冲洗10min后采用10mg/L GA₃浸泡30min后备用；

2)外植体接种：

腋芽接种：取上述GA₃浸泡好的腋芽，用75％酒精浸泡30sec后移入超净工作台，在超净工作台上，先用无菌水冲洗3遍，再用解剖针剥去芽鳞，后用0.1％HgCl₂消毒8min，无菌水冲洗5遍后切去腋芽下方木质部，接种于初代腋芽接种培养基上；

茎段接种：取上述GA₃浸泡好的茎段用75％酒精浸泡30sec后移入超净工作台，在超净工作台上，先用无菌水冲洗3遍，后用0.1％HgCl₂消毒5min，无菌水冲洗5遍，切长1.0-1.5cm、只含1个节点的茎段，接种在初代茎段培养基上；

叶片接种：取上述GA₃浸泡好的叶片用75％酒精浸泡30sec后移入超净工作台，在超净工作台上，先用无菌水冲洗3遍，后用0.1％HgCl₂消毒3min，无菌水冲洗5遍，将叶片切成1.0*1.0cm²小块，并将叶片背面划伤，将背面贴向培养基，接种于初代叶片接种培养基上；

3)增殖培养：上述腋芽接种25d、茎段接种20d、叶片接种40d后，将生长好外植体取切成1.5-2cm茎段，每段含有1-2个茎节，接种于增殖培养基中，在培养室培养35-40d；

4)生根培养：上述外植体增殖培养35-40d后，将外植体切除底部愈伤，然后接种于生根培养基中，在培养室培养45d；

5)炼苗：打开组培瓶盖，进行炼苗，炼苗时间为3-5d；

6)移栽：炼苗后，挑选健壮幼苗洗净根部培养基，移栽到基质育苗盘中，放置于温室中，光照为自然光照，温度为16-30℃，空气相对湿度70％，每日早晚于叶片上喷水，保持叶面及土壤湿润，每隔两周喷施稀释10倍WPM工作液，移栽30d后，大田种植。

2.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，所述步骤1)中外植体来源是怀远县石榴协会天榴坊基地。

3.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤2)中外植体接种时间为3-9月份。

4.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤2)中培养室的培养条件为：光照3000LX，温度24-26℃，光照时间12h/d，相对湿度在60％，培养时间为35-40d。

5.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤2)中腋芽和嫩茎段的接种培养基成分如下：WPM培养基，1mg/L 6-BA，0.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g琼脂，pH为6.2-6.5。

6.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤2)叶片的接种培养基成分如下：MS培养基，0.8mg/L 6-BA，0.5mg/LNAA，0.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g琼脂，pH为6.2-6.5。

7.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤3)中增值培养的培养基成分如下：WPM培养基，0.8mg/L 6-BA，1.5g/L活性炭，20g蔗糖，5.5g琼脂，pH为6.2-6.5。

8.根据权利要求1所述的怀远白花玉石籽石榴无性快速培育方法，其特征在于，步骤4)中生根培养的培养基成分如下：WPM培养基+1mg/L IBA+20g蔗糖+5.5g琼脂，pH为6.2-6.5。