[发明专利]一种组合微生物分段固体发酵生产生物饲料的方法

权利要求书

1.一种组合微生物分段固体发酵生产生物饲料的方法，其特征在于，其具体生产步骤如下：

S1、菌种培养：

一、黑曲霉和绿色木霉培养：取500g的麸皮，然后用水对麸皮进行清洗，清洗至麸皮上没有沾染的淀粉，然后将麸皮取出沥干水，之后将麸皮放入烘干室进行脱水烘干，麸皮烘干完成后，将其分装若干个在500ml的三角瓶中，每个三角瓶中装50g的麸皮，每个三角瓶的瓶口用绒布和牛皮纸封口，将绒布和牛皮纸扎紧，然后将三角瓶放入灭菌锅中进行灭菌，灭菌锅里面的温度控制在120-122℃，当灭菌锅里面的温度山上升至规定温度时，三角瓶在灭菌锅里面保温40min，之后将其取出，待三角瓶的温度自然冷却至室温后，分别接入黑曲霉和绿色木霉斜面菌种，其中黑曲霉和绿色木霉各接种5瓶；然后将接种完成的三角瓶放入培养箱培养，培养箱中的温度控制在28-30℃，三角瓶里面的黑曲霉和绿色木霉菌种在培养箱里面培养7天，每天对麸皮翻面一次，至培养基长满孢子，然后向每瓶三角瓶中加入100ml的无菌水制成孢子悬浮液备用；

二、酵母菌培养：取酵母膏6g，蛋白胨12g，葡萄糖12g，将它们全部溶于600ml的水中，然后将溶液平均分装到250ml的三角瓶中，每个三角瓶中装有50ml的溶液，之后用绒布和牛皮纸对三角瓶封口并扎紧，然后将三角瓶放入灭菌锅中灭菌，灭菌锅里面的温度控制在114-116℃，当灭菌锅里面的温度山上升至规定温度时，三角瓶在灭菌锅里面保温25min后取出，待三角瓶的温度自然冷却至室温后接入酵母斜面菌种，然后将三角瓶置于摇床机里面培养，摇床机里面的温度控制在29-31℃，摇床的转速为180rpm,三角瓶里面的酵母菌在摇床机里面培养24h，取出备用；

三、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌培养：取豆粕粉30g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，硫酸锰0.2g，将它们全部溶解到1000ml的水中，然后将溶液分装到500ml的三角瓶中，每个三角瓶中装100ml的溶液，之后对三角瓶封口，之后将三角瓶置于灭菌锅进行灭菌，灭菌锅里面的温度在120-122℃，当灭菌锅里面的温度达到规定温度后，三角瓶在灭菌锅里面保温25min，然后取出使其自然冷却至室温，之后接入枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌斜面菌种，其中枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌各接种5瓶；然后将接种好的三角瓶放入摇床机里面进行摇床培养，摇床培养的温度控制在34-36℃，转速控制在180rpm,三角瓶里面的枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，在摇床机里面培养12h之后取出备用；

四、乳酸菌培养：取葡萄糖35g，豆粕40g，玉米浆干粉30g，硫酸锰0.05g,然后将它们溶解在1000ml的水中，之后将溶液均匀分装到500ml的三角瓶中，每个三角瓶中的溶液为100ml，之后用绒布与牛皮纸对三角瓶封口并扎紧，将三角瓶置于灭菌锅进行灭菌，乳酸菌的灭菌温度控制在120-122℃，当灭菌锅里面的温度达到乳酸菌灭菌规定温度后，停止温度上升三角瓶在灭菌锅里面保温25min后取出，待三角瓶的温度自然冷却至室温后接入乳酸菌斜面菌种；然后对其进行摇床培养，乳酸菌摇床培养时摇床机里面的温度控制在35-37℃，转速控制在50rpm,三角瓶里面的乳酸菌在摇床机里面培养12h之后取出备用；

S2、固体发酵培养基制备：取棉籽粕1300g，葡萄皮渣320g，麸皮280g，糖蜜100g，将它们倒入900ml的水里面，进行搅拌使其混合均匀，然后将其装在5000ml的玻璃抽滤瓶里面，之后用绒布和牛皮纸对玻璃抽滤瓶封口，用抽滤扣扎紧，将玻璃抽滤瓶置于灭菌锅里面进行灭菌，玻璃抽滤瓶在灭菌锅里面的灭菌温度为120-122℃，当灭菌锅里面的温度上升至规定的灭菌温度后停止温度上升，玻璃抽滤瓶在灭菌锅里面保温40min，之后将其取出待其自然冷却后备用；

S3、固体发酵：

第一阶段发酵：将黑曲霉、绿色木霉和酵母均的培养菌种按2:2：1的比例，以5％接种量从培养瓶的抽滤口接入到固体培养基中并进行震荡，震荡均匀后将其置于摇床机进行培养，摇床培养的温度控制在28-30℃，摇床的转速控制在200rpm，至培养基里面长满菌丝结束第一阶段发酵；

第二阶段发酵：将枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的菌种，按1:1的比例混合后，按10％的接种量，从培养瓶的抽滤口接入到第一阶段发酵结束后的固体培养基中，震荡均匀后将固体培养基放回原摇床机里面继续培养，摇床培养的温度控制在34-35℃，摇床的转速为200rpm，之后对其取样镜检，待取样中有芽孢生成即可终止第二阶段的发酵；

第三阶段发酵：将乳酸菌的菌种按10％的接种量从培养瓶抽滤口接入第二阶段发酵结束的固体培养基中并进行震荡，震荡均匀后将其放入原摇床机里面继续进行培养，摇床培养的温度控制在35-37℃，然后每4h开启一次摇床机震荡5min，摇床转速为200rpm，培养的过程中检测到发酵基质的pH发生了变化，第三阶段发酵结束时发酵基质的pH为4.6，此时整个发酵终止；

S4、产品干燥、检测：发酵完成后对固体培养基中的物质进行干燥，采用气流干燥机进行干燥,控制气流干燥机的温度为40-45℃,干燥后得到发酵产品，然后对发酵产品进行其他指标检测分析。