[发明专利]一种用于检测乳腺肿瘤良恶性程度的分级模型及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测乳腺肿瘤的分级模型及其应用，所述模型通过计算印记基因缺失表达量、印记基因拷贝数异常表达量和印记基因总表达量对印记基因在乳腺肿瘤中的变化进行分级。本发明所述检测模型和装置，以直观的方法表现了印记缺失在乳腺肿瘤病人的组织和细胞样本上的表现，通过对印记基因原位标记的方法，客观、直观、早期、精确地检测出印记(迹)基因的变化，并可以提供量化的模型，为乳腺肿瘤的诊断做出巨大贡献。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及基因诊断领域，涉及一种分级模型及其应用，涉及一种用于检测乳腺肿瘤良恶性程度的分级模型及其应用，具体涉及一组印记基因在检测乳腺肿瘤良恶性程度中的分级模型及其组成的装置。

背景技术

乳腺癌是威胁人类健康和生命的主要恶性肿瘤之一。每年全世界约有140万人被诊断为乳腺癌，并且其发病率还在以每年3-4％的速度增长，而大约有50万人死于该病。乳腺癌占女性癌症总数的32％，死亡总数的15％，成为导致女性死亡的第二大病因。

2007至2013年间，美国不同分期的乳腺癌患者的5年生存率分别为98.9％(I期)，85.2％(II期和III期)和26.％(IV期)，因此乳腺癌的早期诊断和早期治疗具有非常重要的意义。但是乳腺癌在早期没有明显的症状，而X射线和超声对乳房肿块的诊断很大程度上依赖于医生的经验，因此诊断率非常低，在中国不到30％，急需开发更灵敏、更准确的检测手段。

CN 106995837 A公开了乳腺癌早期诊断试剂盒，其包括针对检测目标基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针，其通过联合使用三种分子标志物：乳腺癌筛查基因、乳腺癌CTC标志基因和排除基因，实现早期诊断乳腺癌。CN 1898563 A公开了诊断乳腺癌的方法，具体表述了三种与BRC相关的基因，即A5657、B9769和C7965，通过检测这三种BRC细胞和正常细胞之间有区别的BRC-相关基因的表达水平来诊断乳腺癌。但现有技术检测方法操作比较复杂，而且不能够准确的区分乳腺肿瘤发展到哪个阶段。

传统病理学对细胞的良恶性诊断是基于细胞的大小，形态，侵润性和周边细胞组织的关系来作出判断的。它对细胞(癌症)的早期变化的发现有很大的局限性，因此细胞分子水平的癌症诊断方法，一度成为研究热点。随着人们在分子生物学领域的不断深入研究，越来越多的分子检测技术被运用到癌症诊断中。

癌症的产生是随时间推移而累积的表观遗传改变和基因上的变异所导致的不受控制的细胞生长/分裂。传统病理学诊断根据细胞和组织的大小，形态和结构上的变异，从而做出乳腺肿瘤良恶性判断。随着分子生物学的发展与深入，越来越多的分子检测技术被应用于乳腺癌症的检测。从癌症的发展过程分析，分子层面的改变(表观遗传学和基因学)远早于细胞形态和组织结构的变异。所以分子生物学检测对癌症早期的检测更敏感。

基因组印记是表观遗传学中基因调控的一种方式。其特点是，通过甲基化来自特定亲代的等位基因，使某个基因只有一个等位基因表达，而另一个则陷入基因沉默状态。该种类的基因，被称为印迹(记)基因。印迹缺失是印迹基因去甲基化导致沉默状态的等位基因被激活并且开始基因表达的一种表观遗传改变。大量研究表明，该现象(印迹缺失)普遍存在于各类癌症并且发生时间早于细胞和组织形态改变。与此同时，在健康细胞中，印迹缺失比例极低，与癌细胞成鲜明对比。所以，印迹基因的甲基化状态可以作为病理标记，通过特定分子检测技术，对细胞异常状态进行分析。

基于上述原因，目前的乳腺癌诊断需要新的检测系统和检测模型，基于患者活检样本，解析乳腺癌在细胞层面上存在的分子标记物变化，以此提供更精确的预诊和诊断信息。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供了一种用于检测乳腺肿瘤良恶性程度的分级模型及其应用，该检测装置和模型是用于单细胞和组织水平下早期直观地观察乳腺肿瘤的印记(迹)基因的变化从而判断乳腺肿瘤的良恶性程度。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：