[发明专利]一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法

说明书

本发明涉及生物菌种活性发酵技术，具体的讲是一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法，1：将植物乳杆菌菌株接种在基础培养基中，活化的种子培养基；2：将活化的种子培养基分别接种在另一个基础培养基和发酵培养基中，得到发酵好的菌液；3：收集菌液，采用冷冻离心机进行离心，离心后菌泥进行乳化，并真空冷冻干燥，获得菌粉；4：取菌粉溶于去离子水中，重悬后，离心，重复两次，得到洗涤后的菌体；5：将洗涤后的菌体破菌、离心，取上清液，测定谷氨酰胺合成酶活性，本发明中酶活提升30%以上，同时极大的缩短了发酵时间。

技术领域

本发明涉及生物菌种活性发酵技术，具体的讲是一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法。

背景技术

植物乳杆菌是常见的益生菌，并具有许多的益生功能，如调节肠道健康，抗氧化，抗真菌等，并且具有良好的耐酸，耐胆盐能力，可以在肠道内存活。同时植物乳杆菌还具有运动保健功能，具有缓解肌肉疲劳和损伤的能力。植物乳杆菌缓解肌肉疲劳及损伤的能力和其谷氨酰胺合成的能力相关。谷氨酰胺是一种重要的医药原料，具有治疗胃溃疡，缓解运动综合征和运动疲劳，调节机体免疫和增强脑神经机能等生理功能。植物乳杆菌谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase ,GS)能催化谷氨酸与铵反应生成谷氨酰胺，是谷氨酰胺形成的重要途径之一。高谷氨酰胺合成酶活力的植物乳杆菌在食品，保健品或医药原料方向都有广阔的应用潜力，现有的谷氨酰胺合成酶活力发酵技术主要是针对工业合成菌棒状杆菌（Corynebacterium ），而这类菌是条件致病性的，并不是益生菌。目前对植物乳杆菌谷氨酰胺合成酶高活力发酵研究尚属空白。

为此设计开发一种能将植物乳杆菌GS酶活力在原发酵基础上提高30% 以上的植物乳杆菌GS高酶活发酵技术是十分有必要的。

发明内容

本发明突破了现有技术的难题设计了一种能将植物乳杆菌GS酶活力在原发酵基础上提高30% 以上的植物乳杆菌GS高酶活发酵技术。

为了达到上述目的，本发明设计了一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法，其特征在于：具体按如下步骤进行：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的植物乳杆菌菌株接种在基础培养基中，并在37℃的温度下培养12h，得到活化的种子培养基；

步骤2：将活化的种子培养基以2%~5%的接种量分别接种在另一个基础培养基（作为对照样品）和发酵培养基（测试样品）中，在37℃的温度下培养8~10h，得到发酵好的菌液；

步骤3：收集菌液，采用冷冻离心机进行离心，离心条件为：温度4℃、转速7000r/min、时间10min，离心后菌泥和保护剂按照1：2的比例进行乳化，并真空冷冻干燥12h，冻干机的冷阱温度为-80℃，获得菌粉；

步骤4：取0.5g菌粉溶于50ml去离子水中，重悬后，转速7000r/min、离心5min，收集菌体，得到菌体A；将菌体A再用50ml去离子水重悬，转速7000r/min、离心5min，收集菌体，得到菌体B，再将菌体B用50ml去离子水重悬，转速7000r/min、离心5min，收集菌体，得到洗涤后的菌体；

步骤5：将洗涤后的菌体用10ml磷酸二氢钠缓冲液重悬，在压力为1900bar的高压均质仪中破菌循环20次，之后在12000r/min的离心机中离心10min，取上清液，参考Spafio方法，使用solarbio公司GS酶活性测试试剂盒，测定上清液中谷氨酰胺合成酶活性。

所述基础培养基主要包括葡萄糖20 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 0. 25 g/L、一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温－80 1 g/L。