[发明专利]一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法

权利要求书

1.一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法，其特征在于：具体按如下步骤进行：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的植物乳杆菌菌株接种在基础培养基中，并在37℃的温度下培养12h，得到活化的种子培养基；

步骤2：将活化的种子培养基以2%~5%的接种量分别接种在另一个基础培养基和发酵培养基中，在37℃的温度下培养8~10h，得到发酵好的菌液；

步骤3：收集菌液，采用冷冻离心机进行离心，离心条件为：温度4℃、转速7000r/min、时间10min，离心后菌泥和保护剂按照1：2的比例进行乳化，并真空冷冻干燥12h，冻干机的冷阱温度为-80℃，获得菌粉；

步骤4：取0.5g菌粉溶于50ml去离子水中，重悬后，转速7000r/min、时间5min，收集菌体，得到菌体A；将菌体A再用50ml去离子水重悬，转速7000r/min、离心5min，收集菌体，得到菌体B，再将菌体B用50ml去离子水重悬，转速7000r/min、离心5min，收集菌体，得到洗涤后的菌体；

步骤5：将洗涤后的菌体用10ml磷酸二氢钠缓冲液重悬，在压力为1900bar的高压均质仪中破菌循环20次，之后在12000r/min的离心机中离心10min，取上清液，测定上清液中谷氨酰胺合成酶活性；

基础培养基主要包括葡萄糖20 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 0. 25 g/L、一水硫酸锰0.05 g/L、吐温－80 1 g/L；

发酵培养基主要包括葡萄糖20~60 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 0.25~4.92 g/L、L-谷氨酸 4.41~8.82 g/L、一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温－80 1 g/L；

植物乳杆菌的分类名为植物乳杆菌Lp-G18（Lactobacillus plantarum Lp-G18），保藏地点为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2013690，保藏时间为：2013年12月23日。

2.根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法，其特征在于：所述保护剂主要包括脱脂奶粉110g/L，蔗糖40 g/L，味精20 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌GS高酶活性发酵方法，其特征在于：所述磷酸二氢钠缓冲液的规格为50mM，pH6.5。