[发明专利]一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法

说明书

本发明公开了一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的的方法，包括如下步骤：（1）高压浸提，（2）加压过滤，（3）离心分离，（4）真空浓缩，（5）酶解，（6）柱层析，（7）合成反应。本发明提高了生产加工过程中副产品的利用率，增加了产品的科技含量和经济价值；其次，最大程度保留了胶原蛋白肽和香菇多糖的活性官能团，避免两种成分的活性流失；最后，胶原蛋白肽和香菇多糖的结合，使两者的功能性质相得益彰，在医疗保健、生理活性方面具有更大的应用潜力。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法。

背景技术

香菇多糖是从香菇中提取的有效活性成分，是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。香菇多糖可以激活细胞免疫、诱导免疫因子，调节机体免疫应答，增强白细胞对肿瘤的侵蚀，防止病毒与宿主细胞的结合，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制丙二醛（MDA）生成，减轻脂质氧化，减少胆固醇，调节糖代谢。开发利用小分子胶原蛋白肽作为新的辅助治疗营养前景是非常远大的，生物活性肽是一种以失恬状态存在的具有氨基酸顺序的多肽，通过体内消化释放。低分子肽较蛋白质相比，具有良好的溶解性、低黏度、抗胶凝性、不会产生过敏反应等优点。除此之外，还具有众多的生理功能，可以抑制血管紧张素转化酶活性，预防血小板凝集，具有抗氧化、抗肿瘤的作用，对骨关节炎和骨质疏松症有潜在的治疗效果。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，本发明制作的多糖蛋白聚合物是一种以香菇多糖为骨架的胶原多肽聚集体，该物质实现了香菇多糖和胶原蛋白肽两种活性成分的有机结合，在医药保健、生物活性方面具有大的潜力。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

（1）高压浸提：分别将鸡骨与水按质量比为1:(1.2~1.5)混合，升高温度到40℃，恒温30分钟，进行脱血，之后升温至110-115℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水按质量比为1:(6~7)混合，升温至120-125℃，恒温3小时；

（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；

（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；

（4）真空浓缩：分别对鸡骨提取液和香菇提取液进过浓缩，浓缩至原来体积的1/10，得骨胶原蛋白浓缩液和香菇浓缩液：

（5）酶解：复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液按质量比2:1000混合，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得骨胶原多肽液；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液按质量比1:2000混合，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得香菇多糖溶液；

（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行层析，使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰对应管的洗脱液。使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白（2KDa-10KDa）或多糖（40KDa-100KDa）对应的洗脱峰收集液，将收集液进行透析，得到相应的纯化液。

（7）合成反应：取2kg香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH10-11条件下反应15分钟后加入0.4kg骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后高速离心（6000r/min）并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。

优选的，步骤（1）中鸡骨提取温度110-112℃，香菇提取温度120-122℃。