[发明专利]一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法

权利要求书

1.一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）高压浸提：将鸡骨与水混合，脱血后升温至110-115℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水混合，升温至120-125℃，恒温3小时；

（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；

（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；

（4）真空浓缩：对步骤（2）过滤后的香菇提取液进行浓缩，得香菇浓缩液，对步骤（3）离心分离后的鸡骨提取液进行浓缩，得骨胶原蛋白浓缩液：

（5）酶解：用复合蛋白酶对骨胶原蛋白浓缩液进行酶解，得骨胶原多肽液；用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶对香菇浓缩液进行酶解，得香菇多糖溶液；

（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行纯化、透析和收集得到香菇多糖纯化液和骨胶原多肽纯化液；

（7）合成反应：香菇多糖纯化液和骨胶原多肽纯化液反应得多糖蛋白聚合物。

2.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（1）中鸡骨与水的质量比为1:(1.2~1.5)，香菇与水的质量比为1:(6~7)，脱血条件为40℃，恒温30分钟。

3.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（4）中鸡骨提取液和香菇提取液都分别浓缩至原来体积的1/10。

4.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（5）中复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液的质量比为2:1000，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，保温10分钟。

5.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（5）中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液的质量比为1:2000，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，保温10分钟。

6.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（6）中骨胶原多肽的分子量为2KDa-10KDa，香菇多糖的分子量为40KDa-100KDa。

7.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（6）中使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰对应管的洗脱液，使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白或多糖对应的洗脱峰收集液。

8.根据权利要求7所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：使用紫外光谱仪检测吸光度时，香菇多糖选择200nm处波长，骨胶原多肽选择280nm处波长。

9.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（7）中合成反应条件为：取2000g香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH=10.6条件下反应15分钟后加入400g骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后在6000r/min的转速条件下离心并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。