[发明专利]靶向新型GPC3和CD19双靶点的嵌合抗原受体方法

权利要求书

1.一个mCAR结构，其特征在于：

(1)一段掩盖肽结构；

(2)抗原特异性识别区域；

(3)跨膜区域；

(4)一种或一种以上的共刺激因子区域；

(5)胞内信号区域。

2.权利要求1所述的一段掩盖肽序列为QGQSGQCISPRGCPDGPYVMY。

3.权利要求1所述的抗原识别区域为scFv片段。

4.权利要求3所述的scFv片段包括针对GPC3的scFv和针对CD19的scFv。

5.权利要求1所述的掩盖肽结构和特异性识别区域通过蛋白酶剪切点和两段链接片段(linker)连接。

6.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：

(1)含有依次连接的MASK编码序列、抗GPC3单链抗体的编码序列、抗CD19单链抗体的编码序列、人IgG4铰链区的编码序列、人CD28跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。

7.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

在所述所述CD8信号肽的编码序列如SEQ ID NO:1第1-63位核苷酸序列所示；

和/或

所述Mask信号肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第64-126位多核苷酸所示；

和/或

所述剪切连接片段的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第127-204位多核苷酸所示；

和/或

所述抗GPC3单链抗体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第205-933位多核苷酸所示；和/或

所述抗CD19单链抗体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第994-1728位多核苷酸所示；和/或

所述人IgG4铰链区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1729-1764位多核苷酸所示；和/或

所述人CD28跨膜区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1767-1848位多核苷酸所示；和/或

所述人41BB胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1849-1974位多核苷酸所示；和/或

所述人CD3ζ胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1975-2310位多核苷酸所示；和/或

所述EGFR的片段含有EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区，或由EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区组成；优选地，所述片段含有人EGFR的第310-646位多核苷酸序列，或由人EGFR的第310-646位多核苷酸序列组成；更优选地，所述片段的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第2455-3459位多核苷酸所示。

8.一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：

(1)含有依次连接MASK编码序列、抗GPC3单链抗体、抗CD19单链抗体、人IgG4铰链区、人CD28跨膜区、人41BB胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

优选地，所述抗GPC3单克隆抗体为GC33；

优选地，所述抗CD19单克隆抗体为FMC63。