[发明专利]一种生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体及其在Bt蛋白酶联免疫检测中的应用有效
| 申请号： | 201811257972.3 | 申请日： | 2018-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109517117B | 公开（公告）日： | 2020-12-15 |
| 发明（设计）人： | 刘名茗;胡森华;陈雅露;禹云莉;李雨欣;程巧连;陈秀华;刘凡 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C08F289/00 | 分类号： | C08F289/00;C08F220/56;C08F222/38;C08F220/54;C08F220/14;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/68 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物素 标记 聚合物 纳米 颗粒 模拟 抗体 及其 bt 蛋白酶 免疫 检测 中的 应用 | ||
1.一种生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体，它是模拟Bt Cry1Ac蛋白与烟草天蛾中肠刷状缘膜囊受体钙粘蛋白Bt-R1之间的分子识别机制，以人工合成的丙烯酰胺-多肽单体与其它共存单体以及生物素标记单体反应后得到的聚合物纳米颗粒，所述多肽的氨基酸序列为NITIHITDTNNK，所述共存单体为丙烯酰胺类和/或丙烯酸酯类化合物，所述生物素标记单体为N-(3-甲基丙烯酰氨丙基)-D-生物素胺。
2.一种生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）人工合成丙烯酰胺-多肽单体，所述多肽的氨基酸序列为NITIHITDTNNK；
2）以过硫酸铵为引发剂、四甲基乙二胺为催化剂，将丙烯酰胺-多肽单体与其它共存单体以及生物素标记单体反应得到聚合物纳米颗粒，所述共存单体为丙烯酰胺类和/或丙烯酸酯类化合物，所述生物素标记单体为N-(3-甲基丙烯酰氨丙基)-D-生物素胺。
3.如权利要求2所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体的制备方法，其特征在于：所述丙烯酰胺-多肽单体的摩尔量占丙烯酰胺-多肽单体、共存单体和生物素标记单体总摩尔量的2-30％。
4.如权利要求2所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体的制备方法，其特征在于：所述生物素标记单体的摩尔量占丙烯酰胺-多肽单体、共存单体和生物素标记单体总摩尔量的2-8％。
5.如权利要求2所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体的制备方法，其特征在于：所述聚合反应在氮气保护氛围下，于4～40℃条件下进行。
6.生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体在Bt蛋白酶联免疫检测中的应用，所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体是按权利要求2-5任何一项所述的方法制备的。
7.一种Bt蛋白酶联免疫检测试剂盒，包含酶标板、生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体稀释液、洗涤液、封闭液、酶标工作液、显色液、终止液，其中，所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体是按权利要求2-6任何一项所述的方法制备的。
8.如权利要求7所述的Bt蛋白酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含有牛血清白蛋白的碳酸盐缓冲液，所述牛血清白蛋白的重量浓度为2.0%。
9.如权利要求7所述的Bt蛋白酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记聚合物纳米颗粒模拟抗体稀释液的浓度为20 µg/mL。
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