[发明专利]一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法

说明书

本发明提供一种HPLC‑QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以0.1％甲酸‑水为流动相A，以0.1％甲酸‑乙腈为流动相B，其体积配比为流动相A相：流动相B相为：80～0％：20～100％，进行梯度洗脱；该方法可以测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷、羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮葡糖苷、毛蕊异黄酮、阿魏酸、紫丁香苷、正丁基苯酞、藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、川芎嗪、异秦皮啶、去氢木香内酯、苦杏仁苷、刺五加苷E、芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等中药有效物质成分。该含量检测方法具有操作方法简单，灵敏度高，含量准确的优点。

技术领域

本发明涉及属于中成药化学分析检测领域，尤其涉及一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭 胶囊中有效成分的含量检测方法。

背景技术

龙生蛭胶囊是由陕西步长制药有限公司独家生产，该药物是由黄芪、水蛭、川芎、当归、 桃仁、红花、赤芍、木香、石菖蒲、地龙、桑寄生和刺五加12味中药组成的复方制剂，具有 补气活血、逐瘀通络的功效。上市前临床研究表明，龙生蛭胶囊对脑梗塞总有效率可达91.7％， 并且对中风后遗症常见的中医证候改善率均在80％以上。上市后广泛应用于脑梗死恢复期的 治疗，在西药治疗基础上应用龙生蛭胶囊或者联合其他中药应用均取得卓越效果，如联合应 用龙生蛭和阿司匹林治疗短暂性脑缺血发作疗效确切，可减少其病情的复发率和病情发展为 脑卒中的风险；在西医治疗基础上加用龙生蛭胶囊治疗急性脑梗死具有明显的改善作用。

目前对龙生蛭胶囊的临床研究相对较多，临床效果显著，但是其化学成分研究尚未报道， 其物质基础尚不明确，因此对龙生蛭胶囊化学成分进行含量测定能够有效对复方制剂进行质 量控制，无论是保证用药的安全性和有效性，还是准确全面评价药材质量都是非常必要且有 意义的。目前文献报道仅以黄芪甲苷作为龙生蛭胶囊的质控指标，而中药的药理药效是多种 有效成分协同作用的结果，制剂的质量评定应是多种成分的考察，仅通过测定单一或几个指 标不能较为全面的反映中药质量，多组分活性成分定量分析是中药质量控制最直接和必要的 方法。此外高效液相色谱-三重串联四级杆质谱法具有快速、灵敏度高的特点，质谱多反应监 测扫描模式依据化合物母离子和子离子的质荷比信息进行定量，能够提高检测灵敏度和定量 准确性，是解决多组分化学成分定量的有力工具。因此，迫切需要一种简便、高效、准确、 成本低的质量检测方法能同时定性和定量测定龙生蛭胶囊中多个有效组分。

发明内容

本发明的目的是提供一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方 法，该检测方法对龙生蛭胶囊中黄芪、川芎等药材的19种有效成分，采用多反应监测模式对 3批市售龙生蛭胶囊进行成分含量测定，对龙生蛭中的有效物质成分含量进行检测分析，以 期为龙生蛭胶囊的质量控制和评价其内在品质提供科学依据。

本发明所述的龙生蛭胶囊，均是指由陕西步长制药有限公司生产，其该药物由黄芪225 份、水蛭100份、川芎90份、当归90份、红花90份、桃仁113份、赤芍90份、木香90 份、石菖蒲90份、地龙60份、桑寄生90份、刺五加浸膏35份制备而成。

本发明提供的一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法，所述 含量检测方法包括如下步骤：

⑴、供试品溶液的制备：取龙生蛭胶囊内容物，研细混匀，加入60～80％甲醇，超声处 理20～40min，放冷后用甲醇补充损失的重量，摇匀取上清液，滤过，用时稀释测定，并精密称取吲哚美辛和异鼠李素对照品，加40～60％甲醇溶液，溶解并摇匀，配置成质量浓度为1～8μg/mL的内标溶液，即得；

⑵、对照品标准液的制备：分别精密称取，芍药苷、芒柄花苷、刺五加苷E、羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮苷、藁本内酯、洋川芎内酯I、异嗪皮啶、苦杏仁苷、氧化芍药苷、苯 甲酰芍药苷、黄芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎内酯H、去氢木香内酯，毛蕊异黄酮、 正丁基苯肽、洋川芎内酯A，川芎嗪对照品适量，加入40～60％甲醇进行溶解，配制混合对 照品溶液；