[发明专利]一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法

权利要求书

1.一种HPLC-QQQ/MS法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法，其特征在于，所述含量检测方法包括如下步骤：

⑴、供试品溶液的制备：取龙生蛭胶囊内容物，研细混匀，加入60～80%甲醇，超声处理20～40min，放冷后用甲醇补充损失的重量，摇匀取上清液，滤过，用时稀释测定，并精密称取吲哚美辛和异鼠李素对照品，加40～60%甲醇溶液，溶解并摇匀，配制成质量浓度为1～8μg/mL的内标溶液，即得；

⑵、对照品标准液的制备：分别精密称取，芍药苷、刺五加苷E、羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮苷、藁本内酯、洋川芎内酯I、异嗪皮啶、苦杏仁苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、黄芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎内酯H、去氢木香内酯，毛蕊异黄酮、正丁基苯肽、洋川芎内酯A，川芎嗪对照品适量，加入40～60%甲醇进行溶解，配制混合对照品溶液；

⑶、色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，流动相为A-0.1%甲酸-水，B-0.1%甲酸-乙腈，正离子模式梯度洗脱0-1.5 min，20% B；1.5-3 min，20%-80% B；3-4 min，80% B；4-6min，80%-100% B，负离子模式梯度洗脱0-0.5 min，20% B；0.5-1 min，20%-100%B；1-3 min，100% B，进行梯度洗脱；每次进样预平衡2～10min，流速为0.1～0.8mL/min，进样量2～6；

⑷、质谱条件：电喷雾离子源AJS-ESI，采用多反应监测模式，干燥气温度340～360℃，干燥气流速8～10L/min，喷嘴电压42～48psi，鞘气温度230～270 ℃，鞘气流速9～13L/min，正、负离子分别扫描模式，正离子模式下内标为吲哚美辛，负离子模式下内标为异鼠李素为内标；

⑸、色谱峰测定：将上述步骤⑴和⑵所制得的供试品溶液和混合对照品溶液，按照上述步骤⑶的色谱条件和步骤⑷的质谱条件，测定供试品溶液，得到龙生蛭胶囊有效成分的离子流色谱图，即得。

2.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述步骤⑴供试品溶液制备方法中，取龙生蛭胶囊内容物，研细混匀，加入70%甲醇，超声处理20～40min，放冷后用70%甲醇补充损失的重量，摇匀取上清液，滤过，用时稀释测定。

3.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述步骤⑵对照品标准液的制备中，分别精密称取各待测对照品，所述芍药苷稀释浓度为0.004～3μg/mL，刺五加苷E、羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮苷、藁本内酯、洋川芎内酯I、异嗪皮啶、苦杏仁苷稀释浓度为1μg/mL，氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、黄芪甲苷、阿魏酸、紫丁香苷、洋川芎内酯H、去氢木香内酯稀释浓度为0.1～0.5μg/mL，毛蕊异黄酮、正丁基苯肽、洋川芎内酯A稀释浓度为0.01～0.5μg/mL，川芎嗪稀释浓度为0.01～0.05 μg/mL，并制备成混合对照品溶液。

4.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述⑶色谱条件中，色谱柱的型号为Agilent Rapid Resolution HD。

5.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述⑶色谱条件为：所采用的柱温45℃，每次进样预平衡5min，流速为0.5mL/min，进样量2μL。

6.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述⑷质谱条件为：电喷雾离子源，采用多反应监测模式，干燥气温度350℃，干燥气流速9 L/min，喷嘴电压45psi，鞘气温度250℃，鞘气流速11L/min，正、负离子分别扫描模式，进行测定。