[发明专利]金莲花多糖的提取方法及其体外活性的检测方法

说明书

本发明公开了一种金莲花多糖的提取方法及其体外活性的检测方法，利用水体醇沉的方法提取多糖，用Sevag法除蛋白质；利用比重法，通过与传统保湿剂做对比来研究多糖保湿与吸湿性；将L‑抗坏血酸与多糖作对比，通过测定样品对总还原力、DPPH和ABTS自由基的清除率，来研究金莲花多糖的体外抗氧化性。

技术领域

本发明涉及中草药检测领域，具体涉及一种金莲花多糖的提取方法及其体外活性的检测方法。

背景技术

金莲花是毛茛科植物金莲花的干燥花蕾及花瓣，广泛分布于西北、西南、东北地区。《本草纲目拾遗》谓其“味苦、性寒、无毒”，可以治疗口疮、喉咙肿痛、浮热牙宣、耳疼、目痛，并具“明目、解岚障”等功效。金莲花中主要含有多糖、黄酮、生物碱等多种活性成分，具有清热解毒养肝明目提神健胃的作用，对口腔炎咽炎扁桃体炎急性鼓膜炎等多种炎症均有明显疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金莲花多糖的提取方法及其体外活性的检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

金莲花多糖的提取方法，包括如下步骤：

按料液比1∶60的比例向金莲花花瓣或花茎的粉末中加入适量水，在80℃的条件下水浴加热3h，每隔30min用玻璃棒搅拌一次，反复浸提三次，抽滤得清液，合并上清液，即得；上述金莲花多糖的活性通过以下方法检测：

A、多糖吸湿性检测：

将金莲花多糖样品盛放于铝盒中并于烘箱50℃烘干至恒重后，放于盛有饱和硫酸铵溶液和饱和碳酸钠溶液的干燥器中，即置于相对湿度为81％以及43％(RH81％和RH43％)的干燥器中，并将整个干燥器放置于恒温培养箱中，恒温25℃，分别于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精确称取质量，通过下式计算多糖的吸湿率：吸湿率(％)＝(样品水分的增加量/样品原质量)×100％；

B、多糖保湿性检测

在洗净并干燥的干燥器底部加入干燥的变色硅胶，每份金莲花多糖样品加入20ml蒸馏水，并再次精确称取质量，放置于干燥器内，并将整个干燥器放置于25℃恒温培养箱中，分别于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精确称取质量，通过下式计算多糖的保湿率：保湿率(％)＝(样品水分的减少量/样品原质量)×100％；

C、多糖的抗氧化检测

(1)总还原力的测定

取1ml不同质量浓度多糖溶液，加入2.5ml，pH6.6的磷酸缓冲液，之后加入3ml质量分数1％的铁氰化钾水溶液，充分混匀后于50℃水浴中保温10min；取出后迅速冷却，再加入2.5ml质量分数10％的三氯乙酸水溶液，振荡摇匀，于3000r/min，离心10min；移取上清液2.5ml于试管中，加2.5ml蒸馏水和0.5ml质量分数0.1％的三氯化铁水溶液，室温下避光反应20min，于700nm处测定吸光值；

(2)DPPH清除能力的测定

取1ml不同质量浓度的多糖溶液，加入3ml，0.2mmol/L的DPPH自由基乙醇溶液，混匀后加入4.0ml乙醇溶液，于室温下避光反应30min后，在517nm下测定吸光度，按以下公式计算样品对·DPPH的清除率：

式中：A_c为空白样品的吸光值，A_s为加入不同浓度样品后的吸光值。

(3)ABTS自由基清除能力的测定